Question

2．某实验小组对某种品牌的牛奶中大肠杆菌的数量进行了测定，取3支灭菌的试管，分别加入9mL无菌水，标号为A₁、A₂、A₃，从250mL牛奶中吸取1mL牛奶样液加入试管A₁中，摇匀，然后另取一只吸管从A₁中吸取1mL溶液，加入A₂中，摇匀，以此类推，最后从试管A₃中取0.1mL样液对平板进行涂布，鉴别并计数大肠杆菌菌落．对涂布的三个平板进行统计，大肠杆菌菌落数分别为35、34、42个．请回答下列问题：
（1）本实验中培养大肠杆菌除了必要的营养物质和琼脂外，还需在培养基中添加伊红美蓝．
（2）制备培养基过程中，对培养皿灭菌的常用方法是干热灭菌法，倒平板时培养基的温度不能太低，原因是温度太低导致培养基凝固，无法在培养皿中铺展均匀．
（3）该实验小组接种大肠杆菌所采用的方法是稀释涂布平板法．根据三个平板中菌落数，可推测原250mL牛奶中大肠杆菌的浓度为3.7×10⁸个/L（计算过程中液体混合时不考虑体积变化），该方法测定的大肠杆菌的含量和实际值相比，一般偏小（填“偏大”或“偏小”）
（4）为了使测量结果更加准确，该实验对照组的设置是设一组没有涂布（接种）的培养基（或用等量无菌水涂布的培养基）．
（5）若要用牛奶制作酸奶，接种乳酸菌菌种．

Answer 1

分析 1、培养基按按功能分：

种类	制备方法	特征	用途
选择培养基	培养基中加入某种化学成分	根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选率	加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌
鉴别培养基	加入某种试剂或化学药品	依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计	鉴别和区分菌落相似的微生物伊红和美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌

2、微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．
3、统计菌落数目的方法
（1）显微镜直接计数法
 ①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；②方法：用计数板计数； ③缺点：不能区分死菌与活菌．
（2）间接计数法（活菌计数法）
 ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌．通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌．
②操作
a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性．
b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数．
③计算公式：每克样品中的菌株数=（c÷V）×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数．

解答 解：（1）伊红和美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌，因此本实验中培养大肠杆菌除了必要的营养物质和琼脂外，还需在培养基中添加伊红美蓝．
（2）对培养皿灭菌的常用干热灭菌法；倒平板时培养基的温度不能太低，因为温度太低会导致培养基凝固，无法在培养皿中铺展均匀．
（3）接种微生物常用平板划线法或稀释涂布平板法，其中稀释涂布平板法可用于微生物的计数，因此该实验小组接种大肠杆菌所采用的方法是稀释涂布平板法．根据三个平板中菌落数，可推测原250mL牛奶中大肠杆菌的浓度为 $\frac{35+34+42}{3}×10×10×10×10$×10³=3.7×10⁸个/L；由于两个或多个细胞连在一起时，观察到的是一个菌落，因此该方法测定的大肠杆菌的含量和实际值相比，一般偏小．
（4）为了使测量结果更加准确，该实验对照组的设置是设一组没有涂布（接种）的培养基（或用等量无菌水涂布的培养基）．
（5）若要用牛奶制作酸奶，接种乳酸菌菌种．
故答案为：
（1）伊红美蓝
（2）干热灭菌法      温度太低导致培养基凝固，无法在培养皿中铺展均匀
（3）稀释涂布平板法    3.7×10⁸    偏小
（4）设一组没有涂布（接种）的培养基（或用等量无菌水涂布的培养基）
（5）乳酸菌

点评 本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记培养基的成分、种类及功能；识记接种微生物常用的两种方法，掌握微生物计数的方法，能结合所学的知识准确答题．