题目内容
海洋中的发光细菌具独特的生理特性，可作为环境监测的指标生物．
I．（1）使用 法（答二种），可在固体培养基上获得单菌落，纯化发光菌株．
（2）细菌这类微生物在基因工程中有重要应用，试列举其中一项．
II．现利用发光细菌对海水重金属污染程度进行生物毒性监测，请完善下列实验设计并回答问题：
实验原理：细菌代谢正常时，发光强度稳定；当重金属影响到其代谢时，发光会受到抑制，抑制程度用抑光率（发光被抑制的百分率）表示．
实验材料：发光菌悬液、可能受重金属污染的待测海水水样、3%NaCl溶液、荧光分光光度计（用于测定细菌发光强度）、试管等．
（1）实验步骤：按下表配制待测海水样品稀释液．
请完善实验步骤：
①1号试管中应加入：3%NaCl溶液、海水样品、发光菌悬液分别为 mL．
②各试管静置15min后， ．
（2）计算相对抑光率：按照公式T%= 计算各组相对抑光率．
（3）如果测得上述各组相对抑光率如下：
①请绘制海水浓度对相对抑光率影响的曲线．
②根据结果可以判断待测海水样品 ．
I．（1）使用
（2）细菌这类微生物在基因工程中有重要应用，试列举其中一项．
II．现利用发光细菌对海水重金属污染程度进行生物毒性监测，请完善下列实验设计并回答问题：
实验原理：细菌代谢正常时，发光强度稳定；当重金属影响到其代谢时，发光会受到抑制，抑制程度用抑光率（发光被抑制的百分率）表示．
实验材料：发光菌悬液、可能受重金属污染的待测海水水样、3%NaCl溶液、荧光分光光度计（用于测定细菌发光强度）、试管等．
（1）实验步骤：按下表配制待测海水样品稀释液．
| 组 别 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 3%NaCl溶（mL） | 4.74 | 4.49 | 4.24 | 3.99 | |
| 海水样品（mL） | 0.25 | 0.50 | 0.75 | 1.00 | |
| 发光菌悬液（mL） | 0.01 | 0.01 | 0.01 | 0.01 | |
| 混合液中海水浓度（%） | 0.05 | 0.10 | 0.15 | 0.20 |
①1号试管中应加入：3%NaCl溶液、海水样品、发光菌悬液分别为
②各试管静置15min后，
（2）计算相对抑光率：按照公式T%=
（3）如果测得上述各组相对抑光率如下：
| 组别 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 相对抑光率（%） | 0 | 6 | 13 | 17 | 23 |
②根据结果可以判断待测海水样品
考点：微生物的分离和培养,微生物的利用
专题：
分析：阅读题干可知，本题是通过实验利用发光细菌对海水重金属污染程度进行生物毒性监测，根据问题涉及的具体内容梳理相关知识点，然后分析综合进行解答．
解答：
解：Ⅰ（1）在固体培养基上获得单菌落的接种方法是平板划线法、稀释涂布平板法．
（2）细菌在基因工程中有重要应用如提供工具酶、提供目的基因、提供目的基因的载体、作为受体细胞、提供用于发酵的工程菌等．
Ⅱ（1）由题意可知本题实验的目的是对海水重金属污染程度进行生物毒性监测，细菌代谢正常时，发光强度稳定；当重金属影响到其代谢时，发光会受到抑制．
①分析表格数据可知，1号试管是对照实验，实验设置应遵循单因子变量的原则，所以应加入：3%NaCl溶液、海水样品、发光菌悬液分别为4.99、0、0.01mL．
②各试管静置15min后，利用荧光分光光度计测定各试管发光强度．
（2）计算相对抑光率的计算公式是（对照组发光强度-实验组发光强度）/对照组发光强度×100%．
（3）①注意标出原点、纵轴、横轴的含义．
②应选表格数据可知，混合液中海水浓度不同抑光率不同，海水浓度越大抑光率越大，表明海水样品已受到金属污染．
故大案应为：
I（1）平板划线法、稀释涂布平板法
（2）提供工具酶、提供目的基因、提供目的基因的载体、作为受体细胞、提供用于发酵的工程菌（答对其中一项即可）．
II（1）①4.99、0、0.01 ②利用荧光分光光度计测定各试管发光强度
（2）（对照组发光强度-实验组发光强度）/对照组发光强度×100%
（3）①如图
②受到重金属污染
（2）细菌在基因工程中有重要应用如提供工具酶、提供目的基因、提供目的基因的载体、作为受体细胞、提供用于发酵的工程菌等．
Ⅱ（1）由题意可知本题实验的目的是对海水重金属污染程度进行生物毒性监测，细菌代谢正常时，发光强度稳定；当重金属影响到其代谢时，发光会受到抑制．
①分析表格数据可知，1号试管是对照实验，实验设置应遵循单因子变量的原则，所以应加入：3%NaCl溶液、海水样品、发光菌悬液分别为4.99、0、0.01mL．
②各试管静置15min后，利用荧光分光光度计测定各试管发光强度．
（2）计算相对抑光率的计算公式是（对照组发光强度-实验组发光强度）/对照组发光强度×100%．
（3）①注意标出原点、纵轴、横轴的含义．
②应选表格数据可知，混合液中海水浓度不同抑光率不同，海水浓度越大抑光率越大，表明海水样品已受到金属污染．
故大案应为：
I（1）平板划线法、稀释涂布平板法
（2）提供工具酶、提供目的基因、提供目的基因的载体、作为受体细胞、提供用于发酵的工程菌（答对其中一项即可）．
II（1）①4.99、0、0.01 ②利用荧光分光光度计测定各试管发光强度
（2）（对照组发光强度-实验组发光强度）/对照组发光强度×100%
（3）①如图
②受到重金属污染
点评：本题是知识点是分离微生物常用的接种方法，细菌在基因工程中的应用，实验设计的原则，主要考查学生完善实验步骤，处理分析实验结果获取结论的能力和利用实验数据进行绘图的能力．
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