Question

人和哺乳动物的尿液中含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染．土壤中有些细菌含有可降解尿素的脲酶．如图是某同学从土壤中筛选能降解尿素菌株的实验流程．请回答相关问题：
配置土壤溶液→系列稀释→涂布平板与培养→菌落计数
（1）用以

 

为唯一氮源的培养基筛选能分泌脲酶的细菌．从功能上讲，该培养基属于

 

培养基．培养细菌时必须在

 

条件下操作．对培养基灭菌的常用方法是

 

．
（2）采用

 

法时需要将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培养、菌落计数．在稀释土壤溶液的过程中每步都要在

 

旁进行操作．将接种后的培养皿至于37℃恒温箱中倒置培养，将平板倒置培养的目的是

 

．在接种前需要检测使用的培养基是否被污染，方法是

 

．
（3）向培养基中加入酚红指示剂，若培养基中存在可合成脲酶的细菌，其茵落周围会出现红色，这是尿素被分解产生的

 

使酚红指示剂显色的结果．变色区域越大，表明该菌株降解尿素的能力

 

．

Answer 1

考点：培养基对微生物的选择作用,微生物的分离和培养

专题：

分析：1、利用该分离对象对某一营养物质的“嗜好”，专门在培养基中加入该营养物质，使该微生物大量增殖．这些物质主要是一些特殊的碳源、氮源，如纤维素可用来富集纤维素分解微生物，尿素可用来富集尿素分解微生物．
2、稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞．计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内．经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数．
3、尿素被分解尿素的菌氧化成氨气，氨气会使培养基碱性增强，PH升高，指示剂酚红变红，因此以通过在培养基中加入酚红指示剂，检测培养基pH的变化来判断尿素是否被分解．

解答： 解：（1）用以尿素为唯一氮源的培养基筛选能分泌脲酶的细菌．从功能上讲，该培养基属于选择培养基．培养细菌时必须在无菌条件下操作．对培养基灭菌的常用方法是高压蒸汽灭菌法．
（2）采用稀释涂布平板法时需要将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培养、菌落计数．在稀释土壤溶液的过程中每步都要在 酒精灯火焰旁进行操作．将接种后的培养皿至于37℃恒温箱中倒置培养，将平板倒置培养的目的是防止皿盖上的冷凝水落入培养基，造成污染．在接种前需要检测使用的培养基是否被污染，方法是将未接种的含培养基的培养皿放在37℃恒温箱中倒置培养，观察是否有菌落形成．
（3）向培养基中加入酚红指示剂，若培养基中存在可合成脲酶的细菌，其茵落周围会出现红色，这是尿素被分解产生的 氨使酚红指示剂显色的结果．变色区域越大，表明该菌株降解尿素的能力越强．
故答案为：
（1）尿素    选择    无菌    高压蒸汽灭菌法
（2）稀释涂布平板   酒精灯火焰   防止皿盖上的冷凝水落入培养基，造成污染
将未接种的含培养基的培养皿放在37℃恒温箱中倒置培养，观察是否有菌落形成
（3）氨   越强

点评：本题以脲酶为素材，考查微生物的分离和培养、以氮素为氮源测定能生长的细菌的数量，要求考生识记无菌技术，特别是实验室常用的消毒和灭菌方法；掌握培养基的种类，能应用相应的培养基对土壤中的含有脲酶的细菌进行分离．