Question

6．如表是几种限制梅识别序列及其切割位点，（图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中侧位点先同的酶不重复标注．请回答下列问题：

限制酶	BamHI	BclI	Sau3A I	HindIII
识别序列及切割位点	G1GATC C C CTAG1G	T1GATC A A CTAG1T	1GATC CTAG1	A1AGCT T T TCGA1A

（1）图1中启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位．氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因作为标记基因，其作用是鉴别受体细胞中是否含有目的基因（以便筛选出含有目的基因的细胞）．
（2）用图中质粒和目的基因构建重组DNA，应选用BclI和HindIII两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过DNA连接酶作用后获得重组质粒．将重组质粒导入大肠杆菌时，先用Ca²⁺（或CaCl₂）处理细胞，使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞．
（3）一个基因表达载体的组成，除了图1中质粒所示结构外，还应具有终止子和目的基因．
（4）为了筛选出转入重组质粒的大肠杆菌，应在选择培养基中添加四环素．若用Sau3k I切图质粒最多可能获得7种大小不同的DNA片段．

Answer 1

分析 分析图1：外源DNA上含有限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII和Sau3A I的切割位点，其中限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII的识别序列都能被Sau3k I识别．
分析图2：质粒上有限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII三种限制酶的识别序列和切割位点，其中BamHⅠ的切割位点位于两种抗生素抗性基因上．

解答 解：（1）启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位．标记基因的作用是鉴别受体细胞中是否含有目的基因（以便筛选出含有目的基因的细胞）．
（2）目的基因两侧有限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII和Sau3A I的切割位点，若用限制酶BamHⅠ或Sau3A I切割会破坏质粒上两种抗性基因，因此用图中质粒和目的基因构建重组DNA时，应选用BclI和HindIII两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过DNA连接酶作用后获得重组质粒．将目的基因导入微生物细胞时常有感受态细胞法，即先用Ca²⁺（或CaCl₂）处理细胞，使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞．
（3）基因表达载体的组成除了图中的启动子、标记基因（抗生素抗性基因）外，还有终止子和目的基因．
（4）由于选用BclI和HindIII两种限制酶构建基因表达载体时，破坏了氨苄青霉素抗性基因，但没有破坏四环素抗性基因，因此切割构建为了筛选出转入重组质粒的大肠杆菌，应在选择培养基中添加四环素．由于限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII的识别序列都能被Sau3k I识别，因此用Sau3k I切图质粒最多可能获得7种大小不同的DNA片段．
故答案为：
（1）RNA聚合酶      鉴别受体细胞中是否含有目的基因（以便筛选出含有目的基因的细胞）
（2）BclI和HindIII      DNA连接酶         Ca²⁺（或CaCl₂）
（3）终止子     
（4）四环素      7

点评 本题结合基因结构图和运载体结构图，考查基因工程的技术和原理，重点是限制酶和DNA连接酶，要求考生认真分析图1和图2，能根据图中和表中信息选择合适的限制酶，准确判断使用DNA连接酶连接的结果，再运用所学的知识答题．