题目内容

1．根据基因工程有关内容回答下列问题：
（1）在基因工程的基本操作程序中，核心的步骤是基因表达载体的构建．
（2）构建基因的表达载体时，需要用DNA连接酶将目的基因和运载体连接起来．
（3）利用PCR技术扩增目的基因的前提，是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物．
（4）常用的将目的基因导入微生物细胞的方法是用Ca2+（或CaCl2）处理受体细胞，使其成为能吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞．
（5）某农科院开展“转基因抗虫棉”的科技研究，成功地将某种能产生抗虫毒蛋白的细菌的抗虫基因导入棉花细胞中，得到的棉花新品种对棉铃虫的毒杀效果高达80%以上．
应用Ti质粒的原因是其上的T-DNA可转移到受体细胞并整合到受体细胞的基因组DNA上，因此携带外源基因的DNA片段必须插入到植物细胞染色体上（部位）．
（6）在基因工程的第四步中，要检测转基因生物的目的基因是否转录出了mRNA，采用的方法是分子杂交技术．

分析 基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建．
（2）构建基因的表达载体时，需要用DNA连接酶将目的基因和运载体连接起来．
（3）利用PCR技术扩增目的基因的前提，是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物．
（4）将目的基因导入微生物细胞常用感受态转化法，即用 Ca2+（或CaCl2）处理受体细胞，使其成为能吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞．
（5）农杆菌转化的原理：农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上．根据农杆菌的这一特点，如果将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上，通过农杆菌的转化作用，就可以把目的基因整合到植物细胞中染色体的DNA上．
（6）检测目的基因是否转录出mRNA可采用分子杂交技术．
故答案为：
（1）基因表达载体的构建
（2）DNA连接酶
（3）引物
（4）Ca2+（或CaCl2）    感受态细胞
（5）T-DNA      染色体
（6）分子杂交技术

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能结合所学的知识准确答题．

练习册系列答案
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自然条件下，哺乳动物不发生孤雌生殖。2014年3月，云南农大科研团队把猪卵母细胞进行人为的孤雌激活处理，使其发育成胚胎，移植到代孕母猪体内，获得世界上第一批成活的孤雌生殖克隆猪。这种克隆猪不同于核移植获得的克隆猪，现将两种技术进行比较。

（1）图中过程①②③④是获得孤雌克隆猪的技术流程，那么获得核移植克隆猪的技术流程是过程 （填序号）。

（2）孤雌生殖克隆猪仍然是二倍体生物，但由于缺少 方亲本基因，导致其生长发育中出现多种问题，但给研究者提供了很好的材料。

（3）孤雌激活处理其实质是要激活卵母细胞 ，使其发育成早期胚胎，得到克隆猪。

（4）体细胞核移植技术中也会用到卵母细胞，需要选择 时期的卵母细胞，并用微型吸管吸出 。

（5）早期胚胎移植时，必需移植到同种 的其他雌性动物子宫中，才可能移植成功。

（6）可以从良种不同的克隆猪中提取mRNA进行研究，也可通过 方法得到多种cDNA，并通过 技术扩增产物。
12．2014年7月，FDA批准了利用转基因兔生产的新药Rucones（重组人C1酯酶抑制剂），该药物可用于治疗成人及青少年遗传性血管性水肿患者的急性发作，其部分技术路线如图：

（1）由过程①得到的A为基因表达载体．
（2）过程②常用的方法是显微注射法．
（3）兔的胚胎干细胞是一种未分化细胞，具有全能性，在适当条件下可被诱导分化为多种细胞、组织，在胚胎干细胞培养中，往往加入胚胎成纤维细胞细胞作为饲养层细胞，用以ES细胞分化．
（4）兔的胚胎干细胞不能发育成完整个体，但可以通过核移植技术形成重组细胞，然后利用胚胎移植技术，通过代孕母兔分娩出转基因兔，从转基因兔的乳汁中提取Rucones药物．
9．如图是人体局部内环境示意图，以下叙述正确的是（　　）
A．b液是血浆，d液是组织液B．a液经血液循环进入结构2内
C．c液与a液中物质不能互相交换D．长期蛋白质摄入过少，c液量会增加
16．细胞内糖分解代谢过程如图，叙述错误的（　　）
A．植物细胞能进行过程①和③或过程①或④
B．乳酸菌细胞内，过程①③发生的场所是细胞质基质
C．动物细胞内，过程②比过程①释放的能量多
D．真核细胞细胞质基质中能进行过程①和②
6．下列关于消毒和灭菌的比较，正确的是（　　）
A．消毒可以杀死微生物的营养细胞和所有芽孢
B．灭菌是用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子
C．培养细菌用的培养基可用酒精进行灭菌
D．实验操作者的手可采用干热灭法消毒
13．有些植物的花为两性花（即一朵花中既有雄蕊，也有雌蕊），有些植物的花为单性花（即一朵花中只有雄蕊或雌蕊）．下列有关植物杂交育种的说法中，正确的是（　　）
A．对两性花的植物进行杂交需要对父本进行去雄
B．对单性花的植物进行杂交的基本操作程序是去雄→套袋→授粉→套袋
C．无论是两性花植物还是单性花植物，在杂交过程中都需要套袋
D．两性花的植物在自然条件下均为纯种
10．下列关于基因工程的叙述，错误的是（　　）
A．目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物
B．重组质粒的形成和扩增是在体外完成的
C．人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性
D．载体上的抗性基因能促进目的基因的表达
11．回答下列关于遗传信息的传递与表达的问题
如图是利用基因工程方法生产人生长激素的示意图．

（1）如图1方框内代表的基因工程过程是获取目的基因，构建重组质粒要用到的“化学浆糊”是DNA连接酶．
（2）据图所示推断EcoR I酶识别的核苷酸序列是C．
A．AGGAATTCGT    B．TCCAATTGCA     C．GAATTC     D．CTTAAG
（3）图1中，质粒经EcoR I和HindIII联合酶切后形成1.0kb、0.8kb和3.2kb三个片段，重组质粒经EcoR I酶单切后，形成1.0kb、4.8kb两个片段，目的基因的长度是0.8kb．（1kb=1000碱基）
（4）关于制备图1中大肠杆菌培养基的叙述，正确的是AB（多选）
A．制作固体培养基时可以加入琼脂
B．操作的顺序为计算、称量、溶化、灭菌、倒置培养
C．倒好培养基的培养皿，要立即将平板倒过来放置
D．制备待用的培养基可用紫外线照射进行灭菌
（5）在目的基因增殖过程中，图2表示一个具有四个核苷酸对的DNA片段经硫酸二乙酯（EMS）处理后，在正常溶液中经过2次复制后的产物之一．则说明EMS能将G改变为B．
A．胞嘧啶    B．腺嘌呤     C．胸腺嘧啶     D．鸟嘌呤
图3为大肠杆菌的遗传信息传递和表达过程．
（6）据图3下列说法正确的有①③．
 ①a、b过程所需的原料在细胞中有8种
②a、b过程发生的场所主要在细胞核
 ③b、c中均会发生碱基配对情况，但配对方式不完全相同
④在细胞增殖过程中，只会发生a过程，不会发生b和c过程．

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