Question

2．某研究小组欲将已知抗除草剂基因导人原生质体培育抗除草剂大豆．请回答下列问题：
（1）为获得大量抗除草剂基因，可通过PCR技术进行扩增，也可将其连接到质粒上，通过大肠杆菌培养扩增．
（2）制备叶片原生质体的酶混合液中，一般含较高浓度的甘露醇，其目的是避免制备的原生质体吸水胀破．酶混合液需通过过滤（G6玻璃砂漏斗）灭菌，才能用于无菌原生质体的制备，整个无菌操作过程需在超净台中进行．
（3）可通过显微注射方法，直接将抗除草剂基因导入原生质体的细胞核．此外，还可用聚乙二醇融合、电击等方法导入．导入后的原生质体需再生出细胞壁，经持续分裂获得愈伤组织，进一步分化获得再生植株并扩大繁殖．
（4）利用带有标记的抗除草剂基因特殊片段与从转基因植株提取的RNA进行分子杂交，验证抗除草剂基因是否被整合到受体的细胞中并转录．

Answer 1

分析 1、植物组织培养过程：离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织，愈伤组织再分化形成胚状体，进而形成完整的植株．
2、植物组织培养需要的条件：①消毒灭菌；②一定浓度的植物激素；③适宜的温度；④充足的养料．

解答 解：（1）可通过PCR技术进行体外扩增，获得大量抗除草剂基因．之后抗除草剂基因和运载体质粒重组，构建基因表达载体．
（2）用酶混合液处理植物细胞时，酶混合液中含有适宜浓度的甘露醇，其作用是细胞内外的渗透压，防止细胞吸水胀破．植物组织培养过程中需要无菌无毒的环境，因此酶混合液需通过过滤（G6玻璃砂漏斗）灭菌，才能用于无菌原生质体的制备，整个无菌操作过程需在超净台中进行．
（3）可通过显微注射方法，直接将抗除草剂基因导入原生质体的细胞核．导入后的原生质体需再生出细胞壁，形成重组细胞，经持续分裂获得愈伤组织，进一步分化获得再生植株并扩大繁殖．
（4）要检验抗除草剂基因是否被整合到受体的细胞中并转录，可以用RNA与DNA分子杂交技术验证．
故答案为：
（1）PCR     质粒
（2）吸水胀破     过滤（G6玻璃砂漏斗）   超净台
（3）显微注射      细胞壁
（4）分子杂交

点评 本题考查植物组织培养、基因工程技术，要求考生识记植物组织培养的过程、条件及相关应用；识记基因工程的原理和具体步骤的相关内容，能结合所学的知识准确答题．