Question

17．在生产研究上，常常需要进行微生物的培养和计数．回答下列与微生物的培养与利用有关的问题：
（1）如图是利用平板划线法法将微生物接种到固体培养基上，把混合的菌种逐步稀释分散获得单个菌落．接种后培养基应倒置放在37℃恒温培养箱中进行培养．
（2）分析下面培养基的配方：NaNO₃、KH₂PO₄、NaH₂PO₄、MgSO₄•7H₂O、KCl、H₂O．若此培养基用于筛选尿素分解菌，则应除去上述培养基成分中的NaNO₃，并加入尿素和葡萄糖，以补充其生活所需的氮源和碳源培养基中加入酚红作指示剂的原因是尿素分解菌能合成脲酶将尿素分解为氨，使培养基pH发生改变，酚红由黄变红，使菌落周围呈现红色．
（3）三位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中细菌数量．在对应稀释倍数为106的培养基中，取0.2ml稀释液涂布，得到以下统计结果：
甲同学涂布了1个平板，统计的菌落数是260；
乙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是210、240和246，取平均值232；
丙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是21、212和256，取平均值163；
在三位同学的统计中乙同学的统计结果是相对准确可信的．按照该同学的结果，每毫升原液中的菌体数是1.16×10⁹．
（4）实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理后，才能倒掉．
（5）用这种方法测定密度，实际活菌数量要比测得的数量少，因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察的是一个菌落．

Answer 1

分析 1、据图分析；图示接种方法为平板划线法．微生物的接种方法主要有稀释涂布平板法和平板划线法．筛选目的微生物应该使用选择培养基．培养基中应该有满足目的微生物生活的碳源、氮源水和无机盐等物质．
2、平板划线法是接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的造作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面，在数次划线之后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的子细胞群体-菌落；为了得到由一个细胞繁殖而来的菌落，划线时应注意：第二次及以后的每次划线前要灼烧接种环，冷却后从上一区划线末端开始化，首尾区的划线不能相接．

解答 解：（1）右图是利用平板划线法将微生物接种到固体培养基上，把混合的菌种逐步稀释分散获得单个菌落．接种后培养基应倒置放在37℃恒温培养箱中进行培养．
（2）培养分解尿素的细菌，其氮源是尿素，所以培养基中要除去含氮物质，即去除NaNO₃，并加入尿素和葡萄糖，以提供氮源和碳源．培养基中加入酚红作指示剂的原因是尿素分解菌能合成脲酶将尿素分解为氨，使培养基pH发生改变，酚红由黄变红，使菌落周围呈现红色．
（3）在三位同学的统计中，乙同学的统计结果是相对准确可信的．按照该同学的结果，每克样品中的菌落数=平板上菌落数的平均值÷体积×稀释倍数=233÷0.2×10⁶=1.165×10⁹．
（4）实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理后，才能倒掉．
（5）当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察的是一个菌落，因此用这种方法测得的菌体数比实际活菌数量少．
故答案为：
（1）平板划线法             倒置
（2）NaNO₃       尿素       葡萄糖        氮源       碳源（要求：前后对应）  脲酶
（3）乙         1.16×10⁹      
（4）灭菌
（5）少    当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察的是一个菌落

点评 本题考查微生物的分离和培养、测定某种微生物的数量等知识，要求考生识记培养基的成分和微生物的接种方法，并能准确判断图中的接种方法；能采用稀释涂布平板法对微生物进行计数，并能对实验结果进行分析和简单的计算．