限制酶Ⅰ的识别序列和切点是--G↓GATCC--.限制酶Ⅱ的识别序列和切点是--↓GATC--.在质粒上有酶Ⅰ的一个切点.在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点.用上述两种酶分别切割质粒和含有目的基因的DNA. ①请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端. ②请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端. ③在DNA连接酶的作用下.上述两种不同限制酶切割后形题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

题目内容

限制酶Ⅰ的识别序列和切点是——G↓GATCC——，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是——↓GATC——。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点。在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。用上述两种酶分别切割质粒和含有目的基因的DNA。

①请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。

②请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。

③在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来？为什么？

答案：略
解析：

①

②

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下图一是利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程示意图，请据图作答。

（1）能否利用人的皮肤细胞来完成①过程？并说明理由：。

（2）若A中共有a个碱基对，其中鸟嘌呤有b个，则③④⑤过程连续进行4次，至少需要提供胸腺嘧啶个。

（3）如下图二是运载体和胰岛素基因的某个片段，已知限制酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC－，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是－↓GATC－。GeneI和 GeneII为标记基因，根据图示,判断下列操作正确的是。

A．质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割

B．质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割

C．目的基因和质粒均用限制酶Ⅰ切割

D．目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割

（4）为使过程⑧更易进行，可用（药剂）处理D。通过图一方法生产的胰岛素可能不具备生物活性，为什么？。

（5）人的基因能和异种生物的基因拼接在一起，是因为。

（6）利用转基因牛、羊乳汁提取药物工艺简单，甚至可能直接饮用治病。如果将药物蛋白基因移到动物如牛、羊的膀胱上皮细胞中，利用转基因牛羊尿液生产提取药物比乳汁提取药物的更大优越性在于。

基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶I的识别序列和切点是—G^↓GATCC— ，限制酶II的识别序列和切点是—^↓GATC—。根据图示判断下列操作正确的是（）

A．质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割

B．质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割

C．目的基因和质粒均用限制酶Ⅰ切割

D．目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割

（18分）2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白（GFP）方面做出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白能在蓝色或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：
（1）图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制酶切取目的基因、切割质粒。限制酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC—,限制酶II的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶I的一个切点，在目的基因的两侧各有一个酶II的切点。
①请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。
②请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。
③在DNA连接酶作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来＿＿＿＿，理由是：＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也是最有效的方法是＿＿＿＿＿＿＿＿。
（3）从分子水平上，检测绿色荧光蛋白基因是否插入到猪胎儿成纤维染色体的DNA上，检测方法是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿，检测绿色荧光蛋白基因是否表达，检测方法是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
（4）如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为表达载体上的＿＿＿＿＿＿＿＿。获得的转基因猪，可以解决的医学难题是可以避免＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

科学家将人的生长激素基因与质粒重组后，导入牛的受精卵，并成功从牛奶中提取到了人生长激素，操作流程如下图所示，请据图回答。（已知限制酶I的识别序列和切点是－G↓GATCC－，限制酶II的识别序列和切点是－↓GATC－）。

（1）获取目的基因的主要途径包括从已有物种细胞中提取和＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
（2）据图分析，在构建重组质粒的过程中，目的基因用＿＿＿＿＿＿＿＿进行了切割。
（3）获能的精子和卵细胞相遇后首先发生＿＿＿＿＿＿反应，之后精子接触卵黄膜，并进一步与卵结合，在该过程中，＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿可以防止其它精子入卵。
（4）图中“受体”是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿；“符合要求的个体”是指＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
（5）将牛受精卵进行人工培养后，一般可选择＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿期的、发育良好的胚胎进行移植。

转基因生物可用于生产人类所需要的药用蛋白，如激素、抗体、疫苗、酶等。下图一是通过生物工程培育能产生人胰岛素烟草的过程。请据图回答：

（1）基因工程的核心步骤是______（填字母）。此过程所需的工具酶是

（2）下图二是运载体和反转录得到的胰岛素基因的片段，已知限制酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC－，

限制酶Ⅱ的识别序列和切点是－↓GATC－。GeneI和 GeneII为质粒上的标记基因，根据图分析, 应用限制

酶切割质粒，用限制酶切割目的基因。构建的重组质粒中,除含有外源基因、标记基

因外,还必须含有和。

（3）B过程中，常用_________处理使细菌成为感受态细胞，从而利于重组质粒的导入。

（4）如果从分子水平检测人胰岛素基因是否表达成功，可以采用方法。

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