Question

15．如图表示利用羊生产抗凝血酶的过程，图中amp^R表示氨苄青霉素抗性基因，tet^R表示四环素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ为三种限制酶及酶切位点，据图回答问题：

（1）通常采用PCR技术来扩增获得抗凝血酶基因，其原理是DNA双链复制，需要热稳定DNA聚合（Taq）酶．据图分析，可将目的基因插入四环素（tet^R）抗性基因中．
（2）质粒的化学本质是DNA（小型环状DNA），基因工程常用的运载体还有λ噬菌体的衍生物、动物或植物病毒．
（3）过程①可采用显微注射的方法将重组质粒导入羊受精卵中，可采用分子杂交技术来检测抗凝血酶基因是否转录成功．

Answer 1

分析 1、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．
2、分析题图：图中①表示将目的基因导入受体细胞；②表示胚胎移植技术．

解答 解：（1）PCR技术可在体外大量扩增目的基因，其原理是DNA双链复制；PCR操作过程在较高温度下进行，因此需要热稳定DNA聚合（Taq） 酶．由图可知，目的基因插入四环素（tet^R）抗性基因中．
（2）质粒是小型环状DNA分子；基因工程常用的运载体还有λ噬菌体的衍生物、动物或植物病毒．
（3）将目的基因导入动物细胞常用显微注射法；检测目的基因是否转录可采用分子杂交技术．
故答案为：
（1）PCR    DNA双链复制   热稳定DNA聚合（Taq）      四环素（tet^R）
（2）DNA（小型环状DNA）   λ噬菌体的衍生物、动物或植物病毒
（3）显微注射    分子杂交

点评 本题难度适中，属于考纲中识记、理解层次的要求，着重考查了基因工程的步骤、目的基因导入动物细胞的方法等相关知识，要求考生具有一定的识图能力，并能识记相关基础知识．