Question

8．微载体是由天然葡聚糖或者各种合成的聚合物组成的颗粒，其直径很小，将对细胞无害的微载体加入到培养容器的培养液中，作为载体，可使细胞在微载体表面附着生 长．微载体大规模细胞培养技术已广泛应用于科研生产，其流程图如图．请回答：

（1）图中过程a是利用用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理动物组织，分散细胞．微载体加入培养罐中后，通过搅动使其保持悬浮状态，便于细胞的生长繁殖和代谢，所以选用的微载体颗粒直径应尽可能小．
（2）图中利用培养罐进行动物细胞的体外培养所需的条件是无菌、无毒的环境、营养、温度和pH、气体环境．
（3）图中制备单克隆抗体的过程中，应先用选择性培养基进行筛选出既能迅速大量繁殖，又能产生专一抗体特点）的杂交瘤细胞，然后培养．
（4）利用基因工程可以产生干扰素，可以通过显微注射技术，将重组DNA分子导入哺乳动物的受精卵中，并送入母体，使其发育成转基因动物．

Answer 1

分析 1、动物细胞培养条件：
（1）无菌无毒环境：无菌--对培养液和所有培养用具进行无菌处理；在细胞培养液中添加一定量的抗生素．；无毒--定期更换培养液，防止细胞代谢产物积累对自身造成危害．
（2）营养：
成分：所需营养物质与体内基本相同，例如需要有糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然成分．
培养基类型：合成培养基（将细胞所需的营养物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基）
（3）温度和pH值：哺乳动物多以36.5±0.5℃为宜，多数细胞生存的适宜pH为7.2～7.4．
（4）气体环境：通常采用培养皿或松盖培养瓶，将其置于含95%空气加5%CO₂的混合气体的培养箱中进行培养．O₂：是细胞代谢所必需的  CO₂主要作用是维持培养液的pH．
2、单克隆抗体的制备
（1）制备产生特异性抗体的B淋巴细胞：向免疫小鼠体内注射特定的抗原，然后从小鼠脾内获得相应的B淋巴细胞
（2）获得杂交瘤细胞
①将鼠的骨髓瘤细胞与脾细胞中形成的B淋巴细胞融合；
②用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，该杂种细胞既能够增殖又能产生抗体．
（3）克隆化培养和抗体检测
（4）将杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖
（5）提取单克隆抗体：从细胞培养液或小鼠的腹水中提取

解答 解：（1）图中过程a是分散动物细胞，由于动物细胞之间通过胶原蛋白相连，所以动物细胞培养前可通过胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，使细胞分散．培养动物细胞用培养液制成细胞悬液，便于细胞的生长繁殖和代谢，选用直径应尽可能小的微载体颗粒．
（2）动物细胞的体外培养所需的条件是无菌、无毒的环境、充足的营养、适宜的温度和pH、95%空气加5%CO₂的混合气体的气体环境．
（3）制备单克隆抗体的过程，用选择性培养基进行筛选，筛选出既能迅速大量繁殖，又能产生专一抗体的杂交瘤细胞．
（4）基因工程中，受体细胞是动物细胞时，用显微注射技术将重组DNA分子导入哺乳动物的受精卵中．
故答案为：
（1）用胰蛋白酶或胶原蛋白酶     生长繁殖和代谢
（2）无菌、无毒   气体环境
（3）选择性培养基  既能迅速大量繁殖，又能产生专一抗体
（4）显微注射 受精卵

点评 本题结合微载体大规模细胞培养技术过程图解，考查基因工程、动物细胞工程和制备单克隆抗体的相关知识，要求考生识记转基因技术的过程，掌握单克隆抗体制备过程中筛选的目的，明确动物细胞培养的条件，掌握各技术的步骤和细节是做本题的关键．