Question

15．尿素是一种高浓度氮肥且长期施用没有不良影响，但尿素只有通过土壤中某些细菌分解为氨后才能被植物吸收利用．分解尿索的细菌都能合成脲酶，脲酶能催化尿素水解．某同学要分离土壤中能分解尿素的细菌，并统计每克土壤样品中活菌数目，培养基配方如下：

KH2PO4	Na2HPO4	MgSO4•7H2O	蛋白胨	葡萄糖	尿素	琼脂
1.4 g	2.1g	0.2g	1.0g	10.0g	1.0g	15.0g

（1）根据培养基的成分判断，该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌？不能（能/不能），原因是培养基含蛋白胨，尿素不是唯一氮源，不能选择出只分解以尿素为氮源的微生物
（2）要统计每克土壤样品中活菌数目，宜采用稀释涂布平板法接种，根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的菌落数目就能大约推测出样品中活菌数．
（3）初步分离脲酶通常用凝胶色谱法法，如图，试管中收集到的液体最先出现的是相对分子量较大的蛋白质鉴定分离出的脲酶纯化程度，一般采用电泳法．
（4）该同学设想：由活性脲酶和尿素混合，制成“加酶尿素”，尿素肥效一定更高．为了提高“加酶尿素”中脲酶的利用率，应当采用固定化酶技术．

Answer 1

分析 尿素分解菌体内的脲酶能够将土壤中的尿素分解为氨才能被植物吸收利用，尿素分解菌属于细菌，筛选尿素分解菌需要使用以尿素为唯一碳源的选择培养基．微生物筛选与培养的关键是无菌操作，常用的接种方法是稀释涂布平板法和平板划线法．

解答 解：（1）据题表分析，表中的配方不能筛选分离出尿素分解菌，原因是没有使用选择培养基，即培养基含蛋白胨，尿素不是唯一氮源，不能选择出只分解以尿素为氮源的微生物．
（2）稀释涂布平板法接种常用来进行微生物的计数，统计平板上的菌落数目可以推测出样品中活菌数．
（3）脲酶的化学本质是蛋白质，可以用凝胶色谱法进行初步分离．凝胶色谱柱中大分子的蛋白质先流出，对分离出的脲酶可以用电泳法纯化．
（4）利用固定化酶技术，可以使脲酶反复使用，提高了酶的利用率．
故答案为：
（1）不能  培养基含蛋白胨，尿素不是唯一氮源，不能选择出只分解以尿素为氮源的微生物
（2）稀释涂布平板  菌落数目
（3）凝胶色谱法     相对分子量较大的蛋白质   电泳
（4）固定化酶

点评 本题主要考查目的微生物的筛选与分离，意在强化学生对微生物筛选过程与分离的理解与运用．