Question

4．Bt基因即是苏云金芽胞杆菌（Badcillus  thuringiensis，简称Bt）基因，因其表达产物Bt毒蛋白杀虫效果好、安全、高效等优点而成为应用最为广泛的转杀虫基因．如图为培育转Bt基因苗的基本操作过程．

（1）Bt基因可从构建的Bt基因组文库中获取，也可以从其cDNA文库中获取，从前者获取的基因含有（填“含有”或“不含有”）启动子．若利用PCR技术从cDNA文库中获取Bt基因（基因序列未知），需根据Bt蛋白氨基酸序列设计引物，引物的序列可以有多种，原因是一种氨基酸可能有多种密码子，对应生物DNA碱基序列就会有多种．在PCR体系中需加入其中的全部（填“全部”或“任意1种”或“其中2种”）引物，若Bt基因序列已知，则引物的序列通常为2种．
（2）在构建基因表达载体的过程中，为了方便筛选含有目的基因的细胞，作为运载体的Ti质粒应含有标记基因基因，其中启动子是驱动基因转录的酶识别和结合的位点，而能帮助目的基因整合到宿主细胞染色体上的序列称为T-DNA．图示将目的基因导入受体细胞的方法是农杆菌转化法．
（3）步骤Ⅳ中产生的细胞团称为愈伤组织，步骤Ⅳ和Ⅴ过程要注意控制培养基中生长素与细胞分裂素的浓度比例，以便获得幼苗．

Answer 1

分析 1、目的基因：主要指编码蛋白质的结构基因，也可以是一些具有调控作用的因子．
2、cDNA文库和基因组文库的比较表：

文库类型	cDNA	基因组文库
文库大小	小	大
基因中启动子	无	有
基因中内含子	无	有
基因多少	某种生物的部分基因	某种生物的全部基因
物种间的基因交流	可以	部分基因可以

3、目的基因的检测和鉴定：
（1）分子水平上的检测  
①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术
②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术
③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术
（2）个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）Bt毒蛋白基因属于目的基因，目的基因可从基因组文库中获取，也可从cDNA文库中获取，含有基因中启动子的文库是基因组文库．若利用PCR技术从cDNA文库中获取Bt基因，需根据Bt蛋白氨基酸序列设计引物，引物的序列可以有多种，原因是一种氨基酸可能有多种密码子，对应生物DNA碱基序列就会有多种．在PCR体系中需加入其中的全部引物，若Bt基因序列已知，则引物的序列通常为2种．
（2）标记基因是作用是鉴别和筛选含有目的基因的受体细胞；启动子的作用是RNA聚合酶识别和结合的位点，驱动转录；T-DNA的作用是帮助目的基因整合到宿主细胞染色体上；将目的基因导入受体细胞的方法是农杆菌转化法．
（3）步骤Ⅳ中产生的细胞团称为愈伤组织，步骤Ⅳ和Ⅴ过程要注意控制培养基中生长素与细胞分裂素的浓度比例，以便获得幼苗．
故答案为：
（1）含有   一种氨基酸可能有多种密码子，对应生物DNA碱基序列就会有多种   全部   2
（2）标记基因（抗性基因）  启动子   T-DNA（可转移DNA）  农杆菌转化法
（3）愈伤组织   生长素与细胞分裂素

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作工具及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能结合所学的知识准确答题