Question

11．如图是两种限制酶的切割产生DNA片段末端的形式，请据图冋答：

（1）图中Sma I限制酶识别的碱基序列是CCCGGG，切割位点在G和C之间，两种限制酶识别并切割的位点不同，说明酶的作用具有专一性．
（2）将限制酶切割下来的DNA片段拼接成DNA分子，需要的工具是DNA连接酶，新形成的化学键是磷酸二酯键．
（3）用EcoR I将目的基因从一个DNA分子上切割下来，需要切两处，同时产生4个黏性末端．
（4）基因工程操作中，通常是利用质粒作为载体将重组DNA分子送入细胞，质粒除了结构简单、独立于细菌拟核之外，还有哪些特点符合作为载体的条件？（请回答两点）具有自我复制能力、有多个限制酶切点供外源DNA片段插入、有标志基因供重组DNA的鉴定和选择、进入受体细胞内能自我复制或整合到染色体DNA上随染色体DNA同步复制（答出两点即可）．

Answer 1

分析 1、关于限制酶，考生可以从以下几方面把握：
（1）来源：主要从原核生物中分离纯化出来．
（2）特异性：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂．
（3）结果：形成黏性末端或平末端．
2、DNA连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键．
3、运载体：
（1）常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒．
（2）作为运载体必须具备的条件：①要具有限制酶的切割位点； ②要有标记基因（如抗性基因），以便于重组后重组子的筛选；③能在宿主细胞中稳定存在并复制；④是安全的，对受体细胞无害，而且要易从供体细胞分离出来．
（3）天然的质粒不能直接作为载体，基因工程中用到的质粒都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的．
4、分析题图：图1切割后产生的是黏性末端，图2切割后产生的是平末端．

解答 解：（1）由图可知，限制酶Sma I识别的碱基序列是CCCGGG，切割位点在G和C之间；两种限制酶识别并切割的位点不同，即一种酶只能识别一种特定的核苷酸序列，这说明酶的作用具有专一性．
（2）将限制酶切割下来的DNA片段拼接成DNA分子，需要DNA连接酶，其连接的是两个DNA片段之间的磷酸二酯键．
（3）图1中EcoR I只是切开了目的基因的一侧，要将目的基因从一个DNA分子上切割下来，还需要切割目的基因的另一侧，即共需要切两处，同时产生4个黏性末端．
（4）作为基因工程载体的条件：具有自我复制能力、有多个限制酶切点供外源DNA片段插入、有标志基因供重组DNA的鉴定和选择、进入受体细胞内能自我复制或整合到染色体DNA上随染色体DNA同步复制．
故答案为：
（1）CCCGGG       G和C     专一性
（2）DNA连接酶     磷酸二酯键
（3）两   4
（4）具有自我复制能力、有多个限制酶切点供外源DNA片段插入、有标志基因供重组DNA的鉴定和选择、进入受体细胞内能自我复制或整合到染色体DNA上随染色体DNA同步复制（答出两点即可）

点评 本题结合图解，考查基因工程的相关知识，重点考查基因工程的操作工具，要求考生识记限制酶的特点及作用结果；识记DNA连接酶的作用；识记作为运载体需要具备的条件．