题目内容
【题目】为增加油菜种子的含油量，研究人员尝试将酶D基因与位于叶绿体膜上的转运肽基因相连，导入油菜细胞并获得了转基因油菜品种。
（1）研究人员依据基因的已知序列设计引物，采用____________技术从陆地棉基因文库中获取酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因。所含三种限制酶（ClaI、SacI、XbaI）的切点如下图所示。则用___________和_____________酶处理两个基因后，可得到____________（填图中字母）端相连的融合基因。
（2）将上述融合基因插入右上图所示质粒的T-DNA中，构建____________并导入农杆菌中。将获得的农杆菌接种在含____________的固体平板上培养得到含融合基因的单菌落，再利用培养基震荡培养，可以得到用于转化的浸染液。
（3）剪取油菜的叶片放入浸染液中一段时间，此过程的目的是_________________,进一步筛选后获得转基因油菜。该细胞通过____________技术，可培育成转基因油菜植株。
（4）提取上述转基因油菜的mRNA，在逆转录酶的作用下获得cDNA，再依据______的DNA片段设计引物进行扩增。对扩增结果进行检侧，可判断融合基因是否完成_____。
【答案】PCR（聚合酶链式反应/多聚酶链式反应） ClaⅠ DNA连接 A、D 基因表达载体 四环素 将目的基因导入受体细胞 植物组织培养 融合基因 转录
【解析】
限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，同种限制酶切割能够产生相同的黏性末端，便于质粒和目的基因连接。基因文库包括cDNA文库、基因组文库等，某个群体包含一种生物所有的基因的文库叫基因组文库，而用某种生物的mRNA反转录产生的互补DNA片段属于cDNA文库。
（1）研究人员可采用PCR法从陆地棉基因文库中获取酶D基因。若要将酶D基因与位于叶绿体膜上的转运肽基因相连，根据图中所示酶的识别序列，可以用ClaⅠ限制酶和DNA连接酶处理两个基因后，得到A、D端相连的融合基因。
（2）将上述融合基因插入图乙所示Ti质粒的T-DNA中，构建表达载体即重组质粒并导入农杆菌中，Ti质粒中含有四环素抗性基因，因此可将获得的农杆菌接种在含四环素的培养基上培养。
（3）剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，该操作的目的是将目的基因导入受体细胞；将转基因植物细胞培养成转基因植株需要采用植物组织培养技术。
（4）提取上述转基因油菜的mRNA，在逆转录酶的作用下获得cDNA，再依据融合基因的DNA片段设计引物进行扩增，对扩增结果进行检侧，可判断融合基因是否完成转录。
