题目内容
【题目】质粒P含有氨苄青霉素抗性基因（Ampr）和四环素抗性基因（Tetr），外源DNA的插入会导致插入部位基因的失活。重组人干扰素a-1b是我国第一个国内批准生产的基因工程药物。下图所示为利用质粒P和人干扰素基因构建基因表达载体P1的示意图。回答下列问题：
限制酶 | EcoR V | Sau3AI | BamH I |
识别序列及切割位点 |
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（1）据图分析，为便于过程①所获得的目的基因片段能够顺利与质粒P连接，需要在目的基因片段加上__________序列。成功导入P1的受体菌落具有的抗药性特点为__________。
（2）过程③用到的酶为__________。为了保证目的基因能够正常表达，在构建P1时需要将目的基因插入__________之间。
（3）科学家最早就是利用基因工程方法在大肠杆菌和酵母菌细胞内获得了干扰素，利用大肠杆菌作为受体菌的优点是____________________。以大肠杆菌为受体细胞时通常用人特定细胞的mRNA为材料来获得cDNA，其原理是______________________________。
（4）若要检测是否表达出干扰素，可用__________（物质）对工程菌中提取的蛋白质进行检测。
【答案】GATC 具有四环素抗药性，没有氨苄青霉素抗药性 BamHⅠ和DNA连接酶 启动子和终止子 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少 在逆转录酶的作用下，以mRNA为模板按照碱基互补配对的原则可以合成cDNA 干扰素抗体
【解析】
分析题图：图中①为获取目的基因的过程，②表示利用PCR技术扩增目的基因，③表示构建基因表达载体的过程。
（1）由图可知，目的基因两侧都是黏性未端，根据表中三种限制酶的识别序列和切割位点（EcoRV酶切形成的是平末端，Sau3AI和BamHI酶切形成的末端都是黏性末端，且碱基序列均为GATC）可知，因此还需在引物的一端加上GATC序列，以便于P1的构建和筛选。若用Sau3AI切割会同时破坏氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因，若用限制酶ECoRV切割，产生的是平末端，且会破坏复制原点，因此不能用EcoRV和Sau3AI切割，应该用BamHI切割，其会破坏氨苄青霉素抗性基因，不会破坏四环素抗性基因，因此成功导入P1的受体菌落具有四环素抗药性，没有氨苄青霉素抗药性。
（2）据上分析可知，过程③表示构建基因表达载体的过程，需要用到限制酶和DNA连接酶，其中限制酶为BamHⅠ。为了保证目的基因能够正常表达，在构建P1时需要将目的基因插入启动子和终止子之间。
（3）大肠杆菌具有繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等特点，常利用大肠杆菌作为受体菌。在逆转录酶的作用下，以mRNA为模板按照碱基互补配对的原则可以合成cDNA，故常用人特定细胞的mRNA为材料来获得cDNA。
（4）若要检测是否表达出干扰素，可用干扰素抗体对工程菌中提取的蛋白质进行检测。
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