题目内容
【题目】本题包含Ⅰ和Ⅱ两部分
Ⅰ．用生物技术获得生物新品种的过程，据图回答：
（1）图中采用的目的基因获取方法是__________技术。
（2）在培养转基因绵羊的过程中常用的受体细胞是_________，其中在动物细胞培养过程中，需让培养液中含有一定量的CO2，其主要作用是_______________________。
（3）在抗虫棉的培育过程，其中④过程常用的方法是___________________。
Ⅱ．鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点，图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图(ampR为抗氨苄青霉素基因)，其中①～④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图作答：
（4）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用_________________限制酶，分别对_________________________进行切割。
（5）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体Ⅰ中含有_______________作为标记基因。
（6）研究人员通常采用______________________技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质。
【答案】PCR 受精卵 维持培养液的pH 农杆菌转化法 PstⅠ、SmaⅠ 含鱼抗冻蛋白基因的DNA和质粒 抗氨苄青霉素基因 抗原—抗体杂交
【解析】
1、根据题意和图示分析可知：图中①→②表示PCR扩增DNA的过程；将目的基因a导入绵羊受体细胞后，可以利用早期胚胎培养和胚胎移植等技术培育形成转基因绵羊；另一个途径是将目的基因b与质粒重组形成重组质粒，然后一般利用农杆菌转化法将目的基因导入受体细胞，最后植物组织培养技术将受体细胞培养成抗虫棉转基因植株。2、结合题意分析图解：鱼的抗冻蛋白基因上具有三种限制酶切割位点，PstⅠ酶的切割位点存在于目的基因的两侧，SmaⅠ酶的切割位点存在于目的基因的左侧，而AluⅠ酶的切割位点存在于目的基因的中央，因此不宜选用AluⅠ酶。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点，在选择限制酶时一般选择同种限制酶，以便形成相同的黏性末端。
Ⅰ、（1）根据分析可知，上图中采用的目的基因获取方法是PCR技术。
（2）由于受精卵具有全能性，可使外源基因在相应组织表达，因此通常要将外源基因转入动物的受精卵中。其中在动物细胞培养过程中，需让培养液中含有一定量的CO2，其主要作用是维持培养液的pH值。
（3）在抗虫棉的培育过程，目的基因导入植物细胞中（④）常用农杆菌转化法。
II、（1）在构建基因表达载体中，如果目的基因和载体用同一种限制酶切割，获得的黏性末端相同，将会发生自身环化现象，故应选用不同的限制酶分别对目的基因和载体切割，以获得不同的黏性末端，故应选用PstⅠ和SmaⅠ对含鱼抗冻蛋白基因的DNA、质粒进行切割。
（2）能在含氨苄青霉素的培养基中细胞具有抗氨苄青霉素基因，故基因表达载体Ⅰ中应含有抗氨苄青霉素基因作为标记基因。
（3）在分子水平检测目的基因是否翻译通常采用抗原-抗体杂交技术。
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【题目】呼吸缺陷型酵母菌是野生型酵母菌的突变菌株，其线粒体功能丧失，只能进行无氧呼吸。科研人员为获得高产酒精的呼吸突变型酵母菌进行了相关研究。
（1）酵母菌发酵产生酒精首先要通入无菌空气，目的是______________________。一段时间后密封发酵要注意控制发酵罐中的______________________条件（至少答出2个）。
（2）为优化筛选呼吸缺陷型酵母菌的条件，研究人员设计了紫外线诱变实验，记录结果如下表。表中A、B、C分别是__________。据表中数据分析，最佳诱变处理的条件为_______________________________。
组别 | 1组 | 2组 | 3组 | 4组 | 5组 | 6组 | 7组 | 8组 | 9组 |
照射时间/min | A | 1．5 | 1．5 | 2．0 | 2．0 | 2．0 | 2．5 | 2．5 | 2．5 |
照射剂量/W | 12 | 15 | 17 | 12 | 15 | B | 12 | 15 | 17 |
照射距离/cm | 18 | 20 | 22 | 20 | 22 | 18 | 22 | 18 | C |
筛出率/% | 3 | 7 | 13 | 5 | 15 | 6 | 4 | 7 | 11 |
（3）TTC是无色物质，可以进入细胞内与足量的还原剂[H]反应生成红色物质。为筛选呼吸缺陷突变菌株可以在基本培养基中添加____________，该培养基属于___________培养基。如果出现___________的菌落则为呼吸缺陷型酵母菌，原因是____________________________。
（4）科研人员为检测该呼吸突变型酵母菌是否具备高产酒精的特性，做了相关实验，结果如图所示。由图中数据推测该呼吸缺陷型酵母菌__________（填“适宜”或“不适宜”）作为酒精发酵菌种，依据是______________________。
