Question

7．生物乙醇是指通过微生物的发酵将各种生物质转化为燃料酒精．它可以单独或与汽油混含配制成乙醇汽油作为汽车燃料．我国成功利用农作物废弃物-秸秆（主要成分为纤维素）代替粮食作为原料来进行燃料乙醇的工业化生产．其主要技术流程为：秸秆→秸秆颗粒→反应罐水解→过滤除渣→酒精发酵→蒸馏．
（1）将秸秆颗粒装入反应罐进行水解，需加入能分解纤维素的微生物，从而能将秸秆中的成分转变成葡萄糖．从土壤中获取该微生物时，首先选择培养，然后通过刚果红染色法直接筛选出该微生物．
（2）若要对筛选获得的菌液进行计数，应将菌液用稀释涂布平板法接种到平板上．如果将1mL菌液稀释100倍，在3个平板上分别加入0.1mL的稀释液，经过培养后，3个平板的菌落分别是93、96、99，据此可得出每升菌液中的活菌数为9.6×10⁷，通常运用该方法统计出的菌落数目低于（高于、低于或等于）活菌的实际数目，原因是当两个或多个细胞连在一起时，形成和观察到的只是一个菌落．
（3）酒精发酵阶段需接种的微生物是酵母菌，该微生物在缺氧（无氧）、呈酸性的发酵液中可以生长繁殖，而绝大多数其他的微生物都因无法适应这一环境而受到抑制．

Answer 1

分析 1、微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．
2、统计菌落数目的方法
（1）显微镜直接计数法
 ①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；②方法：用计数板计数； ③缺点：不能区分死菌与活菌．
（2）间接计数法（活菌计数法）
 ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌．通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌．
②操作
a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性．
b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数．
③计算公式：每克样品中的菌株数=（c÷V）×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数．

解答 解：（1）秸秆的主要成分是纤维素，因此将秸秆颗粒装入反应罐进行水解，需加入能分解纤维素的微生物，从而能将秸秆中的成分转变成葡萄糖．在培养基中加入刚果红，可与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，红色复合物不能形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，从而可筛选纤维素分解菌．
（2）接种微生物常用平板划线法和稀释涂布平板法，其中稀释涂布平板法可用于对微生物进行计数．因此，若要对筛选获得的菌液进行计数，应将菌液用 稀释涂布平板法接种到平板上．如果将1mL菌液稀释100倍，在3个平板上分别加入0.1mL的稀释液，经过培养后，3个平板的菌落分别是93、96、99，据此可得出每升菌液中的活菌数为$\frac{93+96+99}{3}$×1000×100×$\frac{1}{0.1}$=9.6×10⁷；当两个或多个细胞连在一起时，形成和观察到的只是一个菌落，因此通常运用该方法统计出的菌落数目 低于活菌的实际数目．
（3）参与果酒发酵的微生物是酵母菌，其在缺氧（无氧）、呈酸性的发酵液中可以生长繁殖，而绝大多数其他的微生物都因无法适应这一环境而受到抑制．
故答案为：
（1）能分解纤维素          刚果红染色   
（2）稀释涂布平板      9.6×10⁷ 低于      当两个或多个细胞连在一起时，形成和观察到的只是一个菌落
（3）酵母菌         缺氧（无氧）、呈酸性

点评 本题考查微生物的分离和培养、果酒和果醋的制作，要求考生识记接种微生物常用的两种方法；识记微生物的计数方法；识记果酒和果醋制作的原理，能结合所学的知识准确答题．