Question

紫杉醇具有独特的抗肿瘤作用．研究人员从红豆杉中发现了一种具有产紫杉醇能力的内生真菌．为探究制备红豆杉内生真菌原生质体的适宜pH和温度，进行了如下实验：①培养菌株，离心收集菌丝体，并用渗透压稳定剂洗涤两次；②将获得的菌丝体，分别置于不同pH或温度的培养液中，并加入适量酶液，震荡、摇匀后，每隔一段时间，取样、过滤、离心，用渗透压稳定剂洗涤两次后，收集纯化的原生质体．③统计原生质体数量，结果如下．

酶解温度（℃）	原生质体产量（×106个/mL）
25	12
28	22
32	31
35	26

分析回答：
（1）步骤②中，加酶液的目的是

 

，洗涤时选用渗透压稳定剂的理由是

 

．
（2）结果表明，制备红豆杉内生真菌原生质体的适宜条件是

 

、

 

、

 

．
（3）检验原生质体再生能力，需要配制再生固体培养基，培养基灭菌常采用

 

法，灭菌后需要冷却到

 

℃左右才能用来倒平板．
（4）实验中将收集到的原生质体浓度为30×10⁶个/mL培养液先稀释l0⁴倍，再各取0.1mL稀释液分别均匀涂布在3个再生固体培养基上培养．一段时间后，统计得到的菌落数分别为：27、21、24．则原生质体再生率（能再生的原生质体数占全部原生质体的比例）约为

 

．

Answer 1

考点：利用微生物进行发酵来生产特定的产物,微生物的分离和培养

专题：

分析：据图分析：原生质体的产量最高的条件为：在PH值=5，酶解时间在4～5小，酶解温度为32℃．通常把去除细胞壁的活细胞称为原生质体．

解答： 解：（1）原生质体是没有细胞壁的活细胞，真菌有细胞壁，加酶后破坏真菌的细胞壁，获得真菌的原生质体；由于真菌的细胞壁遭到破坏，所以洗涤时，渗透压稳定剂加入为防止原生质体被破坏．
（2）由图可知，原生质体的产量最高：在PH值=5，酶解时间在4～5小，酶解温度为32℃．
（3）对固体培养基进行灭菌最常用的方法是高压蒸汽灭菌；灭菌后需要冷却，需要将培养基冷却到不烫手，即大约在50℃作用时才能倒平板．
（4）实验中将收集到的原生质体浓度为30×10⁶个/mL培养液先稀释l0⁴倍，原生质体浓度为3000个/mL，取0.1mL稀释液，得到30个．但实际测得是27、21、24．平均值是24．所以24÷0.1÷3000=0.08．即原生质体再生率为8%．
故答案为：
（1）去除内生真菌的细胞壁   维持原生质体的正常形态，防止其破裂
（2）温度为32℃pH值为5   酶解时间4～5小时（或酶解时间4.5小时左右）
（3）高压蒸汽灭菌   50℃
（4）8%

点评：本题主要考查微生物培养的相关实验，意在强化学生识图识表和实验分析能力．