Question

14．科研人员以抗四环素基因为标记基因，通过基因工程的方法让大肠杆菌生产鼠的β-珠蛋白，治疗鼠的镰刀型细胞贫血症．下列相关实验设计中，不合理的是（　　）

• A． 用β-珠蛋白编码序列加启动子、抗四环素基因等元件来构建基因表达载体
• B． 利用小鼠DNA分子通过PCR克隆出β-珠蛋白基因的编码序列
• C． 用含有四环素的培养基筛选出已经导入β-珠蛋白编码序列的大肠杆菌
• D． 用Ca²⁺处理大肠杆菌后，将表达载体导入具有四环素抗性的大肠杆菌中

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：A、基因表达载体的组成包括启动子、目的基因、标记基因和终止子，因此用β-珠蛋白编码序列加启动子、抗四环素基因等元件来构建基因表达载体，A正确；
B、利用小鼠DNA分子通过PCR克隆出β-珠蛋白基因的编码序列，B正确；
C、标记基因是四环素抗性基因，因此用含有四环素的培养基筛选出已经导入β-珠蛋白编码序列的大肠杆菌，C正确；
D、标记基因是四环素抗性基因，因此受体细胞不能具有四环素抗性，即用Ca²⁺处理大肠杆菌后，将表达载体导入不具有四环素抗性的大肠杆菌中，D错误．
故选：D．

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的概念、原理、操作步骤等，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能结合所学的知识准确判断各选项．