Question

14．有些细菌可分解原油，从而消除有原油泄露造成的土壤污染．某同学欲从污染的土壤中采用富集培养的方法筛选出高效降解原油的细菌、经过的一般步骤是采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定，实验过程如图1所示，请分析回答：

（1）如图A、B是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图解，请分析接种的具体方法．
图A所示的接种方法是稀释涂布平板法，图B所示的接种方法是平板划线法．
（2）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以原油为唯一碳源的培养基上，从功能上讲，该培养培养基属于选择培养基．
（3）在操作④时，为避免培养液中菌体浓度过高，对培养液进行稀释处理．各取0.1mL 已稀释10³倍的菌液分别接种到图A 的三个培养基上培养，记录的菌落数分别为55、56、57，则原始培养液③中每毫升菌体数为5.6×10⁵个．
（4）①→③重复培养的目的是增大分解原油微生物的比例．在培养过程中，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养，结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快．分析其原因是：振荡培养能提高培养液中氧气的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率．
（5）实验中使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃，以防止微生物的扩散．

Answer 1

分析 富集培养技术实际是一种选择分离微生物的技术，其所用培养基为选择培养基．本题是利用生物对特殊碳源的需求，配制特殊的培养基来进行生物的筛选，解答过程中要注意运用无菌操作的一些技术要求．

解答 解：（1）据图分析：图A中菌落均匀分布，接种方法是稀释涂布平板法，图B的接种方法是平板划线法．
（2）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以原油为唯一碳源的培养基上，从功能上讲，该培养培养基属于选择培养基．
（3）每毫升原土壤浸出液样中菌体数为：（55+56+57）÷3÷0.1×10³=5.6×10⁵个．  
（4）经过①②③的重复培养，增大了分解原油微生物的比例．由题意可知，振荡培养比静置培养的细菌生长速度快，由此可以说明该细菌是需要菌，由于振荡培养提高培养液中溶解氧的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率，细菌生长速度加快．
（5）实验中使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃，以防止微生物的扩散．
故答案为：
（1）稀释涂布平板法   平板划线法
（2）土壤样品稀释液   原油    选择
（3）5.6×10⁵
（4）增大分解原油微生物的比例      溶解氧（氧气）  营养物质
（5）灭菌

点评 本题主要考查目的微生物的筛选与培养，意在强化学生对目的微生物的筛选过程的理解与运用．