Question

19．图a示基因工程中经常选用的运载体--pBR322质粒，Amp^r表示氨苄青霉素抗性基因，Tet^r表示四环素抗性基因．目的基因如果插入某抗性基因中，将使该基因失活，而不再具有相应的抗性．为了检查运载体是否导入原本没有Amp^r和Tet^r的大肠杆菌（受体细胞），将大肠杆菌涂布在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图b的结果（黑点表示菌落）．再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图c的结果（空圈表示与b对照无菌落的位置）．据此分析并回答：

（1）pBR322质粒的化学本质是DNA，质粒的复制从质粒上的复制原点开始．
（2）根据用途，题中所用培养基属于选择培养基，与图c空圈相对应的图b中的菌落表现型是抗氨青霉素，不抗四环素，由此说明目的基因插入了Tet^r中．
（3）将质粒导入大肠杆菌，常用CaCl₂处理大肠杆菌，使之处于感受态，增大细胞壁的通透性．

Answer 1

分析 分析题图：a表示质粒，其本质是双链环状DNA分子，其上含有标记基因Amr^r、Tet^r；b培养基中含有氨苄青霉素，能在b上生存的是能抗氨苄青霉素的大肠杆菌，即含有Amr^r；c培养基中含有四环素，能在该培养基上生存的是能抗四环素的大肠杆菌，即含有Tet^r．

解答 解：（1）质粒的本质是双链环状DNA分子．质粒的复制从质粒上的复制原点开始．
（2）图中所用培养基的作用是筛选含有目的基因的大肠杆菌，属于选择培养基；图b中的菌落能抗氨苄青霉素，图c中的实心圈能抗氨苄青霉素和四环素，所以与图c空圈相对应的图b中的菌落能抗氨苄青霉素，但不能抗四环素，由此说明目的基因插入了四环素抗性基因（Tet^r）中．
（3）将目的基因导入微生物细胞常用感受态细胞法，即常用CaCl₂处理大肠杆菌，增大了细胞壁的通透性，使之处于易于吸收周围环境中DNA分子的感受态．
故答案为：
（1）DNA   复制原点
（2）选择培养基    抗氨青霉素，不抗四环素      Tet^r
（3）CaCl₂  感受   壁

点评 本题结合图解，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节问题，能结合所学的知识和图中信息准确答题．