人体内的P53基因是正常细胞内重要的抑癌基因.研究表明P53基因突变可导致肝脏细胞癌变．科学家发现P53基因对体外培养的肝癌细胞生长有抑制作用.拟通过实验加以验证．根据相关信息回答下列问题:(1)培养肝癌细胞:切下新鲜的肝癌组织.在37℃下用酶消化30-40分钟.再置于培养箱中培养．细胞培养过程中.必需满足培养箱中的气体环境外.还需要满足� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

题目内容

人体内的P53基因是正常细胞内重要的抑癌基因，研究表明P53基因突变可导致肝脏细胞癌变．科学家发现P53基因对体外培养的肝癌细胞生长有抑制作用，拟通过实验加以验证．根据相关信息回答下列问题：
（1）培养肝癌细胞：切下新鲜的肝癌组织，在37℃下用

酶消化30～40分钟，再置于培养箱中培养．细胞培养过程中，必需满足培养箱中的气体环境外，还需要满足的条件有

（需要正确写出三种以上）．
（2）体外大量扩增P53基因：该技术中需要加入

种引物和一种特殊的

酶．
（3）将P53基因经过一系列的处理并与脂质体混合，再将混合物滴加至肝癌细胞上，轻轻混匀．最后筛选出含有P53基因的肝癌细胞，脂质体在这个操作中的作用是

．
（4）将两种细胞接入孔空板中，从次日开始检测每孔的细胞总数，绘制成如图所示的增长曲线．曲线表示1的是

细胞，曲线表示2的是

细胞．

考点：动物细胞与组织培养过程,基因工程的应用

专题：

分析：1、分析曲线图：P53基因是正常细胞内重要的抑癌基因，所以导入P53基因的肝癌细胞数目会下降，即曲线2，而普通肝癌细胞能无限增殖，其数目不断上升，即曲线1．
2、PCR扩增反应需要两种引物、模板DNA、原料（4种脱氧核苷酸）、酶（耐高温的DNA聚合酶）．
3、动物细胞培养需要满足以下条件
①无菌、无毒的环境：培养液应进行无菌处理．通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染．此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害．
②营养：合成培养基成分：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等．通常需加入血清、血浆等天然成分．
③温度：适宜温度：哺乳动物多是36.5℃+0.5℃；pH：7.2～7.4．
④气体环境：95%空气+5%CO₂．O₂是细胞代谢所必需的，CO₂的主要作用是维持培养液的pH．

解答： 解：（1）动物细胞培养前需要用胰蛋白酶处理组织，使细胞分散成单个细胞．动物细胞培养的条件：①无菌、无毒的环境：消毒、灭菌；添加一定量的抗生素；定期更换培养液，以清除代谢废物．②营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质．③温度和PH．④一定的气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO₂（维持培养液的PH）．
（2）体外大量扩增P53基因：该技术中需要加入2种引物和一种特殊的热稳定DNA聚合（或耐热的DNA聚合）酶．
（3）脂质体在这个操作中的作用是将P53（目的）基因导入肝癌细胞．
（4）P53基因是正常细胞内重要的抑癌基因，所导入P53基因的肝癌细胞数目下降，而普通肝癌细胞能无限增殖，其数目不断上升，即曲线1是肝癌细胞，曲线2是转入P53基因的肝癌细胞．
故答案为：
（1）胰蛋白酶       无菌无毒的环境、适宜营养、适宜的温度和pH
（2）2             热稳定DNA聚合（或耐热的DNA聚合）
（3）将P53（目的）基因导入肝癌细胞
（4）肝癌细胞     转入P53基因的肝癌细胞

点评：本题考查动物细胞培养和应用、探究实验，意在考查考生的识记能力和理解所学知识要点，把握知识间内在联系的能力；能运用所学知识，解决问题的能力；具有对一些生物学问题进行初步探究的能力，并能对实验现象和结果进行解释、分析和处理．