Question

10．癌胚抗原（CEA）是某些癌细胞表面产生的一种糖蛋白，临床上通过制备CEA的单克隆抗体来诊断癌症．回答下列问题．
（1）一般不直接用单个的B淋巴细胞培养形成细胞群的办法来生产单克隆抗体．原因是B淋巴细胞不能无限增殖．
（2）制备CEA的单克隆抗体时，给小鼠注射的CEA相当于抗原，能使小鼠产生免疫反应．
（3）杂交瘤细胞的扩大培养，既可在体外培养，也可注射到小鼠腹腔内培养．体内培养与体外培养相比，其优点是无需提供营养物质以及无菌环境，操作简便．
（4）已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断．淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖．鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，获得融合细胞（一般只考虑细胞两两融合），并生产单克隆抗体．请回答：
①试管中除融合的杂种细胞外，还有2种融合细胞．
②设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出杂种细胞，并说原理．
方法：用添加氨基嘌呤的培养液培养经融合诱导后的细胞，收集能增殖的细胞．
原理：加入氨基嘌呤后，使D合成途径阻断，仅有D合成途径的骨髓瘤细胞及彼此融合的骨髓瘤细胞就不能增殖，（B淋巴细胞及彼此融合的B淋巴细胞也不能增殖，）但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞中可以利用淋巴细胞中的S途径合成DNA而增殖．．

Answer 1

分析 1、单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体．
2、人淋巴细胞和鼠骨髓瘤细胞混合培养，只考虑细胞两两融合，有三种融合细胞，即淋巴细胞自身融合形成的细胞、骨髓瘤细胞自身融合形成的细胞、杂交瘤细胞．
3、为了筛选出杂交瘤细胞，除去其他细胞，可向培养液中加入氨基蝶呤，使D合成途径阻断，仅有该合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的瘤细胞就不能增殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞可以利用淋巴细胞中的S途径合成DNA而增殖．

解答 解：（1）由于B淋巴细胞不能无限增殖，因此一般不直接用单个的B淋巴细胞培养形成细胞群．
（2）制备CEA的单克隆抗体时，给小鼠注射的CEA相当于抗原，能使小鼠产生免疫反应，产生具有免疫能力的B淋巴细胞．
（3）杂交瘤细胞的扩大培养，既可在体外培养，也可体内培养，即注射到小鼠腹腔内培养．体内培养与体外培养相比，其优点是 无需提供营养物质以及无菌环境，操作简便．
（4）①骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合形成3种杂种细胞，即B淋巴细胞自身融合的细胞、骨髓瘤细胞自身融合的细胞、杂交瘤细胞．
②从培养液中分离出杂种细胞，分析回答：
方法：在培养液中添加入氨基蝶呤再收集增殖的细胞．
原理：加入该物质后，使D合成途径阻断，仅有该合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的瘤细胞细胞就不能增殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞可以利用淋巴细胞中的S途径合成DNA而增殖．
故答案为：
（1）B淋巴细胞不能无限增殖
（2）抗原
（3）腹腔      无需提供营养物质以及无菌环境，操作简便
（4）①2      
②方法：添加氨基嘌呤
原理：加入氨基嘌呤后，使D合成途径阻断，仅有D合成途径的骨髓瘤细胞及彼此融合的骨髓瘤细胞就不能增殖，（B淋巴细胞及彼此融合的B淋巴细胞也不能增殖，）但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞中可以利用淋巴细胞中的S途径合成DNA而增殖．

点评 本题结合单克隆抗体制备的相关知识，考查单克隆抗体制备的原理及具体过程，意在考查学生提取信息和分析问题的能力，学生需要能结合所学的知识准确答题，属于考纲识记层次的考查．