Question

6．利用基因工程培育抗病香蕉的流程如下：

回答下列问题：
（1）获得抗病基因后，常利用PCR技术进行扩增，利用该技术扩增的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物．该技术的完成需要热稳定DNA聚合酶．
（2）使用农杆菌将抗病基因导入香蕉细胞中，农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可将抗病基因转移至香蕉细胞染色体DNA上．
（3）卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长．欲利用添加了卡那霉素的培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，则基因表达载体A的构建时应含有卡那霉素抗性基因，以作为标记基因．
（4）抗病基因进入香蕉细胞内，并在香蕉细胞内维持稳定和表达，该过程称为转化．
（5）欲检测抗病基因是否表达出蛋白质，可从转基因抗病香蕉中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原-抗体杂交予以检测．

Answer 1

分析 1、PCR技术：
（1）概念：PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术．
（2）原理：DNA复制．
（3）前提条件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一对引物．
（4）过程：①高温变性：DNA解旋过程；②低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链．PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开．
2、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）获得抗病基因后，常利用PCR技术进行扩增．利用该技术扩增的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物．该技术的完成需要热稳定DNA聚合酶．
（2）根据受体细胞不同，将目的基因导入受体细胞的方法也不一样．使用农杆菌将抗病基因导入香蕉细胞中，农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可将抗病基因转移至香蕉细胞染色体DNA上．
（3）欲利用含卡那霉素的培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，重组质粒中应同时含有卡那霉素抗性基因，作为标记基因．
（4）抗病基因进入香蕉细胞内，并在香蕉细胞内维持稳定和表达，该过程称为转化．
（5）欲检测抗病基因是否表达出蛋白质，可从转基因抗病香蕉中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原-抗体杂交予以检测．
故答案为：
（1）PCR   引物   热稳定DNA聚合
（2）T-DNA   染色体DNA
（3）卡那霉素抗性基因
（4）转化
（5）相应的抗体进行抗原-抗体杂交

点评 本题结合转基因抗病香蕉的培育过程图，考查基因工程和植物组织培养技术的相关知识，意在考查考生的识图能力和理解所学知识要点的能力；能运用所学知识与观点，对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或得出正确的结论．