题目内容

6．如图是分离、纯化及保存枯草芽抱杆菌菌株的过程示意图：将土壤表层土稀释液煮沸巧分钟（枯草芽抱杆菌的芽抱不会失去活性）静置5分钟后获得样品，进行如下操作：

请回答下列问题：
（1）由题意可知，除用选择培养基外，还有煮沸操作起到筛选作用．
（2）上图的划线操作中，培养基从物质状态分类上属于固体培养基，接种环用灼烧灭菌（灼烧）法进行灭菌，划线过程中第一区和最后一区的划线不能（能/不能）相连．
（3）用稀释涂布平板法在5个培养基平板上，均接种稀释倍数为104的样品液0.1ml，培养一段时间后，平板长出来的菌落数分别为13.160，532，175和187．每毫升样品中的细菌数量为1.74×107个．
（4）用上述方法统计出的菌落数往往比样品中活菌的实际数目少，原因是两个或者多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落．

分析 1、微生物常见的接种的方法：
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．
2、统计菌落数目的方法
（1）显微镜直接计数法
 ①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；②方法：用计数板计数； ③缺点：不能区分死菌与活菌．
（2）间接计数法（活菌计数法）
 ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌．通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌．
②操作
a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性．
b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数．
③计算公式：每克样品中的菌株数=（c÷V）×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数．

解答 解：（1）根据题干信息“将土壤表层土稀释液煮沸巧分钟（枯草芽抱杆菌的芽抱不会失去活性）”可知，除用选择培养基外，还有煮沸操作起到筛选作用．
（2）上图的划线操作中，培养基从物质状态分类上属于固体培养基；接种环用灼烧灭菌（灼烧） 法进行灭菌；划线过程中第一区和最后一区的划线不能相连．
（3）用稀释涂布平板法在5个培养基平板上，均接种稀释倍数为104的样品液0.1ml，培养一段时间后，平板长出来的菌落数分别为13，160，532，175和187．为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，因此每毫升样品中的细菌数量为=$\frac{160+175+187}{3}$×$\frac{1}{0.1}$×104=1.74×107个．
（4）由于两个或者多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此用上述方法统计出的菌落数往往比样品中活菌的实际数目少．
故答案为：
（1）煮沸
（2）固体培养基    灼烧灭菌（灼烧）     不能
（3）1.74×107
（4）少    两个或者多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落

点评 本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记接种微生物常用的两种方法；识记无菌技术；识记计数微生物常用的方法，能结合所学的知识准确答题．

练习册系列答案
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