Question

（Ⅰ）限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是-↓GATC-．在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点．请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端．

 

．
（Ⅱ）回答下列有关基因工程和细胞工程、胚胎工程的问题：
（1）在基因工程的具体操作中，源自不同生物的DNA之所以能够重组的原因是：

 

；相同的基因在不同的生物体内，都能成功表达出相同的产物，其原因是：

 

．
（2）基因工程最终获得成功的标志是：

 

．
（3）在植物组织培养的再分化过程中，若要将愈伤组织诱导出根，则植物生长调节剂的浓度配比应为：

 

．
（4）动物细胞克隆（克隆培养法）要取得成功的最基本要求是

 

．为提高克隆形成率，还应该在培养基中加入

 

 以支持生长．
（5）某医院病理室为确诊一患者的肿瘤是良性还是恶性，切取了一小块肿瘤组织进行培养．培养之前，肿瘤组织必须先用

 

  等处理成单个细胞．若开始培养时取一滴培养液观察有100个肿瘤细胞，经24h培养后，取一滴稀释100倍后再取一滴（设三次的“一滴”等量）观察，发现有64个肿瘤细胞，此肿瘤的细胞周期约为

 

 h．

Answer 1

考点：基因工程的原理及技术,植物培养的条件及过程,动物细胞与组织培养过程,动物体细胞克隆

专题：

分析：1、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．
2、在植物组织培养时，植物激素的使用：

激素使用情况	结果
先使用生长素，后使用细胞分裂素	有利于细胞分裂，但细胞不分化
先使用细胞分裂素，后使用生长素	细胞既分裂也分化
同时使用，且比例适中	促进愈伤组织的形成
同时使用，且生长素用量较高	有利于根的分化、抑制芽的形成
同时使用，且细胞分裂素用量较高	有利于芽的分化、抑制根的形成

解答： 解：（Ⅰ）限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是-↓GATC-．在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点．目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端如图：．
（Ⅱ）（1）所有生物的DNA分子结构相似，因此源自不同生物的DNA能够重组；所有生物共用一套遗传密码，因此相同的基因在不同生物体内都能成功表达出相同的产物．
（2）基因工程最终获得成功的标志是：目的基因顺利表达（或产生人们需要的功能物质）．
（3）在植物组织培养的再分化过程中，若要将愈伤组织诱导出根，则植物生长调节剂的浓度配比应为：生长素多，细胞分裂素少．
（4）动物细胞克隆（克隆培养法）要取得成功的最基本要求是：必须保证分离出来的细胞是一个而不是多个．为提高克隆形成率，还应该在培养基中加入滋养细胞以支持生长．
（5）动物细胞培养时，要用胰蛋白酶处理，使组织细胞分散成单个细胞．开始培养时一滴培养液有100个肿瘤细胞，经24h培养后，一滴培养液中有6400个肿瘤细胞，因此2ⁿ×100=6400，分裂次数n=6，细胞周期约为24÷6=4h．
故答案为：
（Ⅰ）
（Ⅱ）（1）所有生物的DNA分子结构相似      所有生物共用一套遗传密码．
（2）目的基因顺利表达（或产生人们需要的功能物质）  
（3）生长素多，细胞分裂素少．
（4）必须保证分离出来的细胞是一个而不是多个   滋养细胞
（5）胰蛋白酶   4

点评：本题考查基因工程、动物细胞培养的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤；识记动物细胞培养的过程及条件，能结合所学的知识准确答题．