Question

14．如图是利用β-乳球蛋白（BLG）基因5′端调控序列和人乳铁蛋白（hLF）基因构建能在羊乳腺细胞特异性表达的运载体的简要流程图，请据图回答下列问题：

（1）②为PCR过程，除了要加入引物、原料外还需要加入耐高温的DNA聚合酶、模板，在此过程中引物的作用是使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸．
（2）BamH I的识别序列为-G↓GATTC-，Hind III的识别序列为-A↓AGCTT-，选用这两种酶进行操作的意义是避免目的基因和运载体产生的末端任意连接（环化连接），除此之外，③过程还需要DNA连接酶．
（3）BLG基因5′端调控序列能使hLF基因在羊的乳腺细胞中特异性表达，这是因为BLG基因5′端调控序列作为启动子，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动hLF基因转录出mRNA．
（4）要获得能表达目的基因的羊，应将重组质粒导入羊的受精卵（填“乳腺细胞”或“去核卵细胞”、“受精卵”），获得优良胚胎后，为了提高胚胎的利用率，常采用胚胎分割的方法来处理胚胎．

Answer 1

分析 分析题图：图示为利用β-乳球蛋白（BLG）基因5′端调控序列和人乳铁蛋白（hLF）基因构建能在羊乳腺细胞特异性表达的运载体的简要流程图，其中①为逆转录过程，②为获取目的基因的过程，③表示基因表达载体的构建过程．

解答 解：（1）PCR技术的条件：模板DNA（目的基因）、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶），其中引物的作用是使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸．
（2）BamH I的识别序列为-G↓GATTC-，Hind III的识别序列为-A↓AGCTT-，选用这两种酶进行操作时产生的黏性末端不同，这样可以避免目的基因和运载体产生的末端任意连接（环化连接）；③为基因表达在的构建过程，该过程首先需要用限制酶切割含有目的基因的外源DNA和运载体，其次还需要DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组DNA．
（3）BLG基因5′端调控序列能使hLF基因在羊的乳腺细胞中特异性表达，这是因为BLG基因5′端调控序列作为启动子，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动hLF基因转录出mRNA．
（4）培育转基因动物时，应该以受精作为受体细胞，因为受精卵的全能性最高，且具有促进全能性表达的物质；来自同一个胚胎的后代具有相同的遗传物质，因此为了提高胚胎的利用率，常采用胚胎分割的方法来处理胚胎．
故答案为：
（1）耐高温的DNA聚合酶、模板       使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸
（2）避免目的基因和运载体产生的末端任意连接（环化连接）      DNA连接
（3）BLG基因5′端调控序列作为启动子，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动hLF基因转录出mRNA
（4）受精卵          胚胎分割

点评 本题结合图解，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的概念、原理、操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能正确分析题图，再结合所学的知识准确答题．