Question

18．乳糖酶能够催化乳糖水解为葡萄糖和半乳糖，具有重要应用价值．乳糖酶的制备及固定化步骤如下：

（1）筛选产乳糖酶的微生物L时，宜用乳糖作为培养基中的唯一碳源．培养基中琼脂的作用是凝固剂．从功能上讲，这种培养基属于选择培养基．
（2）培养微生物L前，宜采用灼烧方法对接种环进行灭菌．
（3）纯化后的乳糖酶可用电泳法检测其分子量大小．在相同条件下，带电荷相同的蛋白质电泳速度越快，说明其分子量越小．
（4）乳糖酶宜采用化学结合法（共价键结合法）进行固定化，可通过检测固定化乳糖酶的（ 酶）活性[或（酶）活力]确定其应用价值．除化学结合法外，酶的固定化方法还包括包埋法、物理吸附法、离子吸附法及交联法等．

Answer 1

分析 筛选产乳糖酶的微生物L时，宜用乳糖作为培养基中的唯一碳源，即利用选择培养基筛选．
固定化技术包括包埋法、物理吸附法和化学结合法（交联法），由于细胞相对于酶来说更大，难以被吸附或结合，因此多采用包埋法，固定化细胞在多步酶促反应中发挥连续催化作用，但如果反应底物是大分子物质，则难以自由通过细胞膜，从而限制固定化细胞的催化反应．固定化酶实质上是将相应酶固定在不溶于水的载体上，实现酶的反复利用，并提高酶稳定性，酶的各项特性（如高效性、专一性和作用条件的温和性）依然保持．

解答 解：：（1）已知乳糖乳糖酶能够催化乳糖水解为葡萄糖和半乳糖，筛选产乳糖酶的微生物L时，宜用乳糖作为培养基中的唯一碳源，培养基中琼脂的作用是凝固剂，从功能上讲，这种培养基属于选择培养基．
（2）为了避免杂菌污染，在培养微生物前，对接种环等接种工具应采用灼烧灭菌．
（3）用电泳法纯化乳糖酶时，若在相同条件下分离带电荷相同的蛋白质，则其分子量越小，电泳速度越快．
（4）固定化酶的应用价值与酶的活性（或活力）有关，因此用化学结合法固定化乳糖酶时，可通过检测固定化乳糖酶的活性（或活力）来确定其应用价值．固定酶 化的方法包括化学结合法、包埋法、物理吸附法、离子吸附法及交联法等．
故答案为：
（1）乳糖 凝固剂 选择培养基
（2）灼烧
（3）小
（4）（ 酶）活性[或（酶）活力]包埋法   物理吸附法

点评 本题考查微生物的培养、蛋白质的分离及固定化酶技术和细胞固定化技术的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合分析问题和解决问题的能力．