Question

8．请根据所学知识回答下列生物技术实践中的有关问题：
（1）科技小组想从哺乳动物的红细胞中提取蛋白质，蛋白质的提取和分离一般分为四步：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定；采用凝胶色谱法分离蛋白质，当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量小（“大”、“小”）移动速度较慢．
（2）科技小组在进行微生物计数的实验中：欲测定饮用水中大肠杆菌数目，将已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养基上，大肠杆菌的菌落呈现黑色．测定某一土壤样品中的活菌数时应采用稀释涂布平板法，在4个对应稀释倍数为10⁴的培养基中均接种0.1ml稀释后的土壤样品溶液，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为11、176、128、161，计算每克土壤样品中的细菌数量为155×10⁷个．
（3）筛选纤维素分解菌常用刚果红染色法，接种过程要注意对接种器材进行灭菌．

Answer 1

分析 1、统计菌落数目的方法
（1）显微镜直接计数法
 ①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；②方法：用计数板计数； ③缺点：不能区分死菌与活菌．
（2）间接计数法（活菌计数法）
 ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌．通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌．
②操作
a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性．
b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数．
③计算公式：每克样品中的菌株数=（c÷V）×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数．
2、分解纤维素的微生物的分离实验的原理：
①土壤中存在着大量纤维素分解酶，包括真菌、细菌和放线菌等，它们可以产生纤维素酶．纤维素酶是一种复合酶，可以把纤维素分解为纤维二糖，进一步分解为葡萄糖使微生物加以利用，故在用纤维素作为唯一碳源的培养基中，纤维素分解菌能够很好地生长，其他微生物则不能生长．
②在培养基中加入刚果红，可与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，红色复合物不能形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，从而可筛选纤维素分解菌．

解答 解：（1）血红蛋白的提取和分离一般分为：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定四步；凝胶色谱法（分配色谱法）的原理：分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢．因此采用凝胶色谱法分离蛋白质时，当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量小移动速度较慢．
（2）欲测定饮用水中大肠杆菌数目，将已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养基上，大肠杆菌的菌落呈现黑色．测定某一土壤样品中的活菌数时应采用稀释涂布平板法，在4个对应稀释倍数为10⁴的培养基中均接种0.1ml稀释后的土壤样品溶液，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为11、176、128、161，为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，因此每克土壤样品中的细菌数量为9176+128+161）÷3×10⁷=155×10⁷个．
（3）刚果红染液可以和纤维素结合形成红色的复合物，纤维素分解菌产生的纤维素酶可以将纤维素分解为葡萄糖而使菌落周围出现透明圈，利用这一点，可以使用刚果红染液鉴别纤维素分解菌．接种过程要注意对接种器材进行灭菌．
故答案为：
（1）纯化和纯度鉴定       小
（2）伊红美蓝    黑      稀释涂布平板    155
（3）刚果红染色法      灭菌

点评 本题考查微生物的分离和培养等知识，对于此类试题，需要考生注意的细节较多，如实验的原理、实验采用的方法、实验现象等，需要考生在平时的学习过程中注意积累．