摘要:常用的转化方法:受体细胞不同导入方法有所不同 植物细胞:最常用的是农杆菌转化法.其次还有基因枪法和花粉管通道法等.受体细胞可以是植物体细胞 动物细胞:最常用的是显微注射技术.受体细胞多是受精卵 微生物细胞:先用Ca2+ 处理细胞.使其成为感受态细胞.再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合.在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子.完成转化过程.受体细胞多为大肠杆菌 第四步:目的基因的检测和表达 检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因--DNA分子杂交 检测目的基因是否转录出了mRNA--用标记的目的基因作探针与mRNA杂交 检测目的基因是否翻译成蛋白质--从转基因生物中提取蛋白质.用相应的抗体进行抗原-抗体杂交 有时还需进行个体生物学水平的鉴定.如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状. 特别提醒:在基因工程操作步骤中.只有第三步将目的基因导入受体细胞不需要碱基互补配对.其余三个步骤都涉及碱基互补配对.

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常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖,自然界中一些酵母菌能分解木糖产生酒精但对酒精的耐受能力较差。下面是利用木糖发酵产生酒精的酿酒酵母的培育过程,请分析回答下列问题。

(1)将自然界中采集到的葡萄带回实验室,用________将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中,瓶中的液体经适当稀释后,用________方法接种于固体培养基上,在适宜的条件下培养,获得各种菌落。

(2)将培养基上的酵母菌菌株转接到以木糖为唯一碳源的培养基中,无氧条件下培养一周后,有些酵母菌死亡,说明这些酵母菌________。从存活的酵母菌提取DNA,并用PCR技术大量扩增目的基因。

(3)将目的基因连接到一种穿梭质粒(可以在大肠杆菌中复制和在酿酒酵母中表达的质粒)上。该质粒具有两种标记基因,即氨苄青霉素抗性基因和尿嘧啶合成酶基因。大肠杆菌被该质粒转化后,应接种于含________的培养基上进行筛选。将质粒导入酵母菌时,由于氨苄青霉素不能抑制酵母菌繁殖,应选择缺乏________能力的酿酒酵母作为受体菌。从细胞结构看,酵母菌不同于大肠杆菌的主要特点是________。

(4)对转基因酿酒酵母发酵能力进行测试,结果如图所示:

据图分析,将转基因酿酒酵母接种在以________为碳源的培养基中进行发酵能力测试,最初培养基中的________糖被快速消耗,随着发酵继续进行,转基因酿酒酵母能够___________________,说明所需菌株培育成功。

 

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研究发现:端粒在不同物种细胞中对于保持染色体稳定性和细胞活性有重要作用,端粒酶是一种逆转录酶,能延长缩短的端粒(缩短的端粒其细胞复制能力受限),从而增强体外细胞的增殖能力。端粒酶在正常人体组织中的活性被抑制,在肿瘤中被重新激活,端粒酶可能参与恶性转化。科学家通过探究DNA载体途径的RNA干扰技术抑制端粒酶的活性,从而抑制肿瘤细胞生长增殖以寻找一种抑制肿瘤细胞的新途径。

  方法思路:

  ①构建干扰质粒          (插入针对人体端粒酶逆转录酶亚基(hTERT)的mRNA的干扰序列)和对照质粒PSG—CTR(插入不针对人体任何mRNA序列的对照组序列)。

  ②将空质粒PSG(不含目的基因)、干扰质粒和对照质粒分别感染肝癌细胞。

 












③一段时间后观察检测细胞的               。计算细胞凋亡率,绘制肝癌细胞生长曲线。结果如下图:

 

请回答:

  (1)完成实验步骤中的空格:

    ①            ;②           

  (2)在构建质粒时,要将质粒导入大肠杆菌细胞并用        培养基进行筛选鉴定,然后再提取。因此,在构建的表达载体质粒上必须含有       

  (3)端粒酶可以通过以自身的      为模板,          为原料来合成端粒DNA。

(4)根据题意请分析实验结果并得出结论。

                                       

                                      

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研究发现:端粒在不同物种细胞中对于保持染色体稳定性和细胞活性有重要作用,端粒酶是一种逆转录酶,能延长缩短的端粒(缩短的端粒其细胞复制能力受限),从而增强体外细胞的增殖能力。端粒酶在正常人体组织中的活性被抑制,在肿瘤中被重新激活,端粒酶可能参与恶性转化。科学家通过探究DNA载体途径的RNA干扰技术抑制端粒酶的活性,从而抑制肿瘤细胞生长增殖以寻找一种抑制肿瘤细胞的新途径。
方法思路:
①构建干扰质粒                  (插入针对人体端粒酶逆转录酶亚基(hTERT)的mRNA的干扰序列)和对照质粒PSG—CTR(插入不针对人体任何mRNA序列的对照组序列)。
②将空质粒PSG(不含目的基因)、干扰质粒和对照质粒分别感染肝癌细胞。
③一段时间后观察检测细胞的                            。计算细胞凋亡率,绘制肝癌细胞生长曲线。结果如下图:

请回答:
(1)完成实验步骤中的空格:
                       ;②                       
(2)在构建质粒时,要将质粒导入大肠杆菌细胞并用              培养基进行筛选鉴定,然后再提取。因此,在构建的表达载体质粒上必须含有               
(3)端粒酶可以通过以自身的          为模板,                   为原料来合成端粒DNA。
(4)根据题意请分析实验结果并得出结论。
                                                                       
                                                                    

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