回答基因工程的有关问题：(共9分)
（1）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生黏性末端，也可能产生_____末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生_____（相同，不同）黏性末端的限制酶。
（2）利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因等，其中RNA聚合酶识别和结合的部位是_____。在用表达载体转化大肠杆菌时，常用_____处理大肠杆菌，以利于表达载体进入。为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用放射性同位素标记的______ 作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为______。为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成胰岛素，常用______          技术。
(3)如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的_____中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的______上。

用来治疗糖尿病的胰岛素，过去主要靠从动物体器官、组织中提取，但因受原料限制，无法推广。现在，可以用发酵工程的方法来生产胰岛素。若用大肠杆菌发酵来生产胰岛素，并结合基因工程，写出其生产过程：

(1)构建转入人胰岛素基因的工程菌。

①提取目的基因：用胰岛素基因探针从人的胰岛细胞中获取             ，再用      法制备人的胰岛细胞目的基因。

②目的基因与运载体结合：从大肠杆菌的细胞中提取       ，并用      酶切割质粒，使其露出               。用同一种酶切割目的基因使其产生相同的               ，再将目的基因插人质粒切口处，加入适量的               酶，这样就形成了一个               和               的重组DNA。

③将目的基因导人受体细胞：将大肠杆菌用          处理，以增大               的通透性，让重组DNA进人大肠杆菌体内。

④目的基因的检测和表达：在用一定的方法检测出目的基因已导人大肠杆菌细胞内，并            后，再对该种大肠杆菌扩大培养。

(2)发酵生产。如图为发酵罐，回答：（括号中填数字,如[1]）

①配制适合大肠杆菌的培养基，调整        ，然后对培养基进行             处理并装入发酵罐，将上述大肠杆菌接种于发酵罐发酵

②若经检测若发现放料口排出的旧培养基中微生物细胞形态多样，甚至出现畸形，则此时微生物的生长处于     期，加料口[   ]添加新培养基的速度应该适当     ，并从[   ]以适当速度通入     

③若该装置阶段发酵的目的是为扩大培养生产酵母菌菌种，则应尽可能延长         期，采取的主要措施为：加料口放料的速度都           ，通人的无菌空气成分中应           ，搅拌的速度适当             

④影响发酵过程中温度变化的因素是                

⑤发酵过程中pH变化的原因是                     

⑥搅拌器搅拌的作用是                          

(3)发酵完毕后，从培养基中            并             胰岛素，经过一定的加工成为药用胰岛素，经           合格后，可投入使用。

回答有关基因工程的问题：（9分）
（1） 构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生粘性末端，也可能产生   _   末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生_____（相同，不同）粘性末端的限制酶。
（2）利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是                                                    。在用表达载体转化大肠杆菌时，常用   处理大肠杆菌，以利于表达载体进入：为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的          片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为                 。为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成                _，常用抗原-抗体杂交技术。
（3）如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的       _    中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的       _上。

以重组DNA技术为核心的基因工程正在改变着人类的生活。请回答下列问题。
(1)获得目的基因的方法通常包括    和   。
(2)切割和连接DNA分子所使用的酶分别是         。
(3)运送目的基因进入受体细胞的载体一般选用病毒或     ，后者的形状呈     。
(4)由于重组DNA分子成功导入受体细胞的频率 ，所以在转化后通常需要进行   操作。
(5)将人胰岛素基因分别导入大肠杆菌与酵母菌，从两者中生产的胰岛素在功能和  序列上是相同的。

基因工程自20世纪70年代兴起后，发展迅猛，成果显著。
Ⅰ利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是       ______。在用表达载体转化大肠杆菌时，常用            处理大肠杆菌，以利于表达载体进入；为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为       __________   。为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成蛋白质，常用______________________技术。
Ⅱ近10年来，PCR技术（多聚酶链式反应）成为分子生物学实验室的一种常规手段，下图为PCR原理示意图，据图回答问题。

（1）基因工程中，利用PCR技术来________________，PCR技术依据的原理是DNA的半保留复制，生物体内也能完成DNA的复制，但有所不同，图中A过程称为____________，在生物体内需要____________才能完成。图中B 过程的完成需要_________等条件（3分）。
（2）若DNA样品的长度为100个碱基对，且A占15%，则完成三次循环，共需要提供的胞嘧啶脱氧核苷酸___________个。