图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”示意图，所用载体为质粒A。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因，质粒A导入细菌B后，其上的基因能得到表达。请回答下列问题：

（1）人工获得目的基因的途径一般有哪两条？

（2）如何将目的基因和质粒相结合形成重组质粒（重组DNA分子）？

（3）目前把重组质粒导入细菌细胞时，效率还不高；导入完成后得到的细菌，实际上有的根本没有导入质粒，有的导入的是普通质粒A，只有少数导入的是重组质粒。此处可以通过如下步骤来鉴别得到的细菌是否导入了质粒A或重组质粒：将得到的细菌涂布在一个有氨苄青霉素的培养基上，能够生长的就是导入了质粒A或重组质粒的，反之则没有。使用这种方法鉴别的原因是___________。

（4）若把通过鉴定证明导入了普通质粒A或重组质粒的细菌放在含有四环素的培养基上培养，会发生的现象是___________，原因是___________________。

（5）导入细菌B细胞中的目的基因成功表达的标志是___________________。

（16分）下面是在农杆菌Ti质粒基础上构建的植物抗虫基因表达载体的示意图。请据图回答：

（1）为了扩大基因表达载体的数量，需将基因表达载体再植入农杆菌中并对农杆菌进行培养，此时，在培养农杆菌的培养基中应加入              ，该培养基按用途划分属于 。

（2）带有抗虫基因的农杆菌进入棉花细胞后，要检测抗虫基因是否插入到棉花的染色体DNA上，常用的方法是               ；要检测抗虫基因在棉花体内是否翻译成蛋白质，必需先从转基因棉花中提取蛋白质，再用相应的   方法来确定是否已形成毒蛋白；如果在个体水平上鉴定抗虫基因是否转化成功，可以通过   实验来实现。

（3）Ti质粒的分子大小有200kb（千碱基对）左右，然而能进入植物细胞的只有一小部分约25kb（称为T—DNA）。在这一小部分的两端各有一个25bp（碱基对）长的重复序列LB和RB，这两个序列对这一小部分DNA进入植物细胞是不可缺少的。实验证明只要Ti质粒上保留了这两个序列，即使这两个序列之间的其它序列被不同程度地改变（如插入一个外源DNA片段），这一小部分也仍然可以转移并整合到植物的基因组中。

①  在构建的T—DNA过程中，还应该具有和  等结构，才能保证进入植物体的抗虫基因能够顺利表达。

②Ti质粒不同于其它质粒的最大特点就是它含有T—DNA，如果给你一个不含T—DNA的质粒，你如何把它构建成含有T—DNA的质粒？               。

（16分）下面是在农杆菌Ti质粒基础上构建的植物抗虫基因表达载体的示意图。请据图回答：

（1）为了扩大基因表达载体的数量，需将基因表达载体再植入农杆菌中并对农杆菌进行培养，此时，在培养农杆菌的培养基中应加入             ，该培养基按用途划分属于。
（2）带有抗虫基因的农杆菌进入棉花细胞后，要检测抗虫基因是否插入到棉花的染色体DNA上，常用的方法是              ；要检测抗虫基因在棉花体内是否翻译成蛋白质，必需先从转基因棉花中提取蛋白质，再用相应的  方法来确定是否已形成毒蛋白；如果在个体水平上鉴定抗虫基因是否转化成功，可以通过  实验来实现。
（3）Ti质粒的分子大小有200kb（千碱基对）左右，然而能进入植物细胞的只有一小部分约25kb（称为T—DNA）。在这一小部分的两端各有一个25bp（碱基对）长的重复序列LB和RB，这两个序列对这一小部分DNA进入植物细胞是不可缺少的。实验证明只要Ti质粒上保留了这两个序列，即使这两个序列之间的其它序列被不同程度地改变（如插入一个外源DNA片段），这一小部分也仍然可以转移并整合到植物的基因组中。
① 在构建的T—DNA过程中，还应该具有和 等结构，才能保证进入植物体的抗虫基因能够顺利表达。
②Ti质粒不同于其它质粒的最大特点就是它含有T—DNA，如果给你一个不含T—DNA的质粒，你如何把它构建成含有T—DNA的质粒？              。