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回答有关“基因工程”方面的问题
番茄营养丰富，是人们喜爱的一类果蔬。但普通番茄细胞中含有多聚半乳糖醛酸酶基因，控制细胞产生多聚半乳糖醛酸酶，该酶能破坏细胞壁，使番茄软化，不耐贮藏。为满足人们的生产生活需要，科学家们通过基因工程技术，培育出了抗软化、保鲜时间长的番茄新品种。操作流程如图。请据图回答。
1．抗多聚半乳糖醛酸酶基因在该实验中是作为________基因。图中通过过程①形成重组DNA，需要的工具酶有限制性核酸内切酶和________。限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是－G’GATCC－，请画出农杆菌质粒被限制酶I切割所形成的DNA片段末端碱基序列________。
2．在筛选出含重组DNA的土壤农杆菌时通常依据质粒上的________的表达。
3．从图中可见，mRNA1和mRNA2的结合直接阻碍了多聚半乳糖醛酸酶合成时的________过程，最终使番茄获得抗软化的性状。
4．为促使图中培养②过程的顺利完成，通常需要在培养基中加入的调节物质是________，比例为________；要快速繁殖转基因抗软化番茄植株，目前常用的生物学技术是________，这种技术可保留番茄植株抗软化、保鲜时间长的优良性状，其原因是________。
5．为防止转基因番茄通过花粉将抗多聚半乳糖醛酸酶基因传播给其它植物而造成基因污染，可将抗多聚半乳糖醛酸酶基因导入到番茄植物细胞的________（结构）中。
（11分）下图是利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程示意图，请据图作答。
（1）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生粘性末端，也可能产生_____末端。过程②必需的酶是 酶，过程③必需的酶是 酶。
（2）在利用AB获得C的过程中，必须用 切割A和B，使它们产生相同的粘性末端，再加入 ，才可形成C。利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是__ ___。
（3）为使过程⑧更易进行，可用 （药剂）处理D。
（4）为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为___ ___。为了检测胰岛素基因请转录的mRNA是否翻译成_____，常用抗原-抗体杂交技术。
（5）如果要将某目的基因通过农杆菌传话法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的_____中，然后通过农杆菌转化作用将目的基因插入植物细胞的______上。
（11分）下图是利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程示意图，请据图作答。
（1）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生粘性末端，也可能产生_____末端。过程②必需的酶是 酶，过程③必需的酶是 酶。
（2）在利用AB获得C的过程中，必须用 切割A和B，使它们产生相同的粘性末端，再加入 ，才可形成C。利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是__ ___。
（3）为使过程⑧更易进行，可用 （药剂）处理D。
（4）为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为___ ___。为了检测胰岛素基因请转录的mRNA是否翻译成_____，常用抗原-抗体杂交技术。
（5）如果要将某目的基因通过农杆菌传话法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的_____中，然后通过农杆菌转化作用将目的基因插入植物细胞的______上。
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回答下列有关基因工程和克隆技术的问题。（10分）
2006年12月22日，我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪在东北农业大学的种猪场自然分娩产出，这标志着我国在转基因克隆猪技术领域已达到世界领先水平。下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图回答：
63、说出绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程中用到了哪些生物工程技术？
利用了哪些原理？ （本题答案从下列所给选项中选择填写）
①转基因技术；②细胞核移植技术；③胚胎移植技术；④干细胞技术；⑤动物细胞培养技术
⑥基因突变；⑦基因重组；⑧动物细胞核具有全能性；⑨动物细胞具有全能性
64、过程①②中必需用到的酶分别是 和 。绿色荧光蛋白基因之所以能与质粒重组，原因是 。
65、早期胚胎的培养液成分较复杂，除一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及 等物质。
通过上图中过程①的方法获取目的基因的数量是有限的，要获得大量的绿色荧光蛋白基因可以利用PCR技术。PCR扩增反应（如下图所示）中加入的TaqDNA聚合酶能在接近沸点的条件下，发挥延伸DNA子链的作用，将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上。请回答：
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PCR（DNA聚合酶链式反应）技术示意图：
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66、你认为TaqDNA聚合酶一定是从下列哪种生物体细胞中分离提取的？
A．水母细胞 B．猪胎儿成纤维细胞 C．极端嗜热菌 D．大肠杆菌
67、下面的表达式不能反映TaqDNA聚合酶的功能，为什么？ 。
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68、用限制酶EcoRV、MboI单独或联合切割同一种质粒，得到DNA片段长度如下图（1kb即1000个碱基对），请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRV、MboI的切割位点和标出碱基对数。（2分）
农业科技工作者在烟草中找到了一抗病基因，现拟采用基因工程技术将该基因转入棉花，培育抗病棉花品系。请回答下列问题。
（1）要获得该抗病基因，可采用_________、_________等方法。为了能把该抗病基因转入到棉花细胞中，常用的载体是_________。
（2）要使载体与该抗病基因连接，首先应使用_________进行切割。假如载体被切割后，得到的分子末端序列为
，则能与该载体连接的抗病基因分子末端是_________。
■图不清楚
（3）切割完成后，采用DNA连接酶酶将载体与该抗病基因连接，连接后得到的DNA分子称为_________。
（4）再将连接得到的DNA分子导入农杆菌，然后用该农杆菌去感染棉花细胞，利用植物细胞具有的_________性进行组织培养，从培养出的植株中筛选出抗病的棉花。
（5）该抗病基因在棉花细胞中表达的产物是_________
A．淀粉
B．脂类
C．蛋白质
D．核酸
（6）已知BarnHⅠ与BglⅡ的识别序列及切割位点如图所示，用这两种酶和DNA连接酶对一段含有数个BarnH工和BglⅡ识别序列的DNA分子进行反复的切割、连接操作，若干循环后_________和_________序列明显增多。
