我国科学家成功地将苏云金芽孢杆菌伴孢晶体蛋白基因转移到棉细胞内，培养出抗虫棉，在基因工程操作过程中，需要特定的限制酶切割目的基因和质粒。已知限制酶I识别序列和切点—G↓GATC—，限制酶Ⅱ识别序列和切点—↓GATC—；若在运载体质粒上有一段限制酶I的识别序列，在抗虫基因两侧各有一段限制酶Ⅱ的识别序列。下列相关叙述正确的是（　）

A．只能用同一种限制酶分别切割该质粒和目的基因

B. 用限制酶I切割质粒，用限制酶Ⅱ切割目的基因，也能形成相同的黏性末端

C．因为抗虫基因编码区与棉细胞基因不同，要使其在棉细胞内成功表达需要对其编码区进行修饰

D．该质粒上无限制酶Ⅱ的识别序列，不能被限制酶Ⅱ切割

我国科学家成功地将苏云金芽孢杆菌伴孢晶体蛋白基因转移到棉细胞内，培养出抗虫棉，在基因工程操作过程中，需要特定的限制酶切割目的基因和质粒。已知限制酶I识别序列和切点—G↓GATC—，限制酶Ⅱ识别序列和切点—↓GATC—；若在运载体质粒上有一段限制酶I的识别序列，在抗虫基因两侧各有一段限制酶Ⅱ的识别序列。下列相关叙述正确的是（　）

A．只能用同一种限制酶分别切割该质粒和目的基因

B. 用限制酶I切割质粒，用限制酶Ⅱ切割目的基因，也能形成相同的黏性末端

C．因为抗虫基因编码区与棉细胞基因不同，要使其在棉细胞内成功表达需要对其编码区进行修饰

D．该质粒上无限制酶Ⅱ的识别序列，不能被限制酶Ⅱ切割

（1）过程①所需要的酶是　　　　　。

（2）在构建基因表达载体过程中，应用限制性核酸内切酶　　 　切割质粒，用限制性核酸内切酶　 　 切割目的基因。用限制酶切割目的基因和运载体后形成的黏性末端通过___________　　 原则进行连接。人的基因之所以能与大肠杆菌的DNA分子进行重组，原因是　　　　 　　　　 。

（3）在过程③一般将受体大肠杆菌用_________处理，以增大　　　　　的通透性，使含有目的基因的重组质粒容易进入受体细胞。

（4）将得到的大肠杆菌B涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上得到如下图a的结果（黑点表示菌落），能够生长的细菌中已导入了　　　　　　 ，反之则没有导入；再将灭菌绒布按到培养基a上，使绒布表面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图b的结果（空圈表示与a对照无菌落的位置）。与图b空圈相对应的图a中的菌落表现型是　　　　　　　　 ，这些细菌中导入了________________。

（5）人体的生长激素基因能在细菌体内成功表达是因为　　　　　　　　　　　　 。写出目的基因导入细菌中表达的过程　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

(8分)我国基因工程药物的研制和生产发展迅猛，下图是利用基因工程方法生产人生长激素的示意图。pBR322质粒为基因工程中经常选用的载体，Amp^r表示青霉素抗性基因，Tet^r表示四环素抗性基因，该质粒上有限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ的识别和切割位点，如图（已知普通大肠杆菌中不含有pBR322质粒上任何基因；限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ切割形成的末端均不相同）。回答问题：

(1)过程②为　      ，质粒上的抗性基因作用是　       。

(2)为防止④过程中出现多种重组质粒，一般用两种限制酶分别对目的基因和质粒进行剪切，从而把目的基因和质粒各自剪切出　      (不同／相同)的黏性末端。基因表达载体中目的基因除包含以上所描述的结构外，还必须含有        。

(3)如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ中的任意两种，同时对多个质粒pBR322进行切割，则形成的DNA片段共　     种；为提高⑤过程成功率，常用　     溶液处理大肠杆菌。

(4)现在用限制酶PstI切割目的基因和质粒pBR322，完成过程④、⑤后，将三角瓶内的大肠杆菌先接种到甲培养基上，形成菌落后用无菌牙签挑取甲上的单个菌落，分别接种到乙和丙两个培养基的相同位置，一段时间后，菌落的生长状况如上图所示。甲培养基上能生长的大肠杆菌中含有　     基因，与丙相比，乙培养基中少了两个菌落，说明丙培养基中这两个菌落中的大肠杆菌　      。