(07广州市毕业测试)（15分）请分析回答下列有关现代生物科技方面的问题：
（1）基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤：第一步是目的基因的获取，第二步是基因表达载体的构建，第三步是将目的基因导入受体细胞，第四步是                  。

① 通常在第一步和第二步的操作中需要相同的工具酶是         。
② 利用PcR 技术扩增目的基因的过程中，目的基因受热形成单链并与引物结合，在      酶的作用下延伸形成DNA。
③ 采用农杆菌转化法将目的基因导人植物细胞后，培养该细胞再生成植株的过程中，往往需要使用植物激素，人为地控制细胞的         和         。
④ 如果转基因植物的花粉中含有毒蛋白，将引起的安全性问题包括         。

A．生物安全      B．环境安全      C．食品安全    D．伦理道德问题

⑤ 蛋白质工程的基本原理是：预期蛋白质功能．设计预期的蛋白质结构→推测应有的序列         →找到相对应的         序列。
（2）在DNA 粗提取与鉴定的实验中，选择适当浓度的NaCl 溶液就能充分溶解DNA而使杂质沉淀，或析出DNA过滤去除溶液中的可溶性杂质。请在右图中作出DNA 在NaCl 溶液中的溶解度曲线。
（3）请回答下列有关单克隆抗体制备的问题：

① 与动物细胞融合过程相比，植物体细胞杂交在细胞融合之前要用         处理，作用是去除         。

② 经人工诱导后，骨髓瘤细胞和产生免疫反应的动物的脾脏细胞中的B 淋巴细胞融合。由于可能产生多种融合细胞，因此还需对融合细胞进行         。

（4）请回答下列有关胚胎工程的问题：

①在胚胎移植过程中，供、受体母牛选择好后，要用激素进行同期发情处理的原因是         ，以保证移植的胚胎能够继续正常发育。

② 人类的胚胎发育过程中，细胞分化开始于         阶段。
③ 在胚胎工程中，通过给良种母畜注射外源         ，使其排出更多的卵细胞，称为超数排卵。

基因疫苗是指将编码外源性抗原的基因导入人和动物体内,让其在宿主细胞中表达抗原蛋白，诱导机体产生免疫应答。某科研所计划培育具有口蹄疫免疫特性的高产奶牛。请回答下列问题：
（1）培育具有口蹄疫免疫特性的高产奶牛应用的工程技术有           。（写出2种）
（2）基因表达载体的构建是基因工程的核心，一个完整的基因表达载体至少包括目的基因、          、          、          等部分。  
（3）检测高产奶牛体内是否出现口蹄疫病毒的抗原蛋白，分子水平上的检测方法是从转基因牛中提取蛋白质，用相应的抗体进行                  ，如果出现杂交带，表明奶牛中出现了抗原蛋白。
（4）为提高胚胎的利用率，可采用       技术。由此可获得       相同的多个胚胎，应该选用                                        胚进行分割．
（5）胚胎工程的最后一道工序是               。

小鼠基因敲除技术2007年获诺贝尔奖。80年代初胚胎干细胞的分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础，87年Thompsson首次建立了完整的ESC基因敲除技术的模型，此后几年中基因敲除技术得到了进一步的发展和完善，其技术路线如下。
①胚胎干细胞的获得；
②构建重组基因表达载体；
③用一定方法把重组DNA转入受体细胞内；
④用一定培养基筛选已击中的细胞；
⑤将击中的细胞转入胚胎，通过胚胎移植使其生长为转基因动物，然后对该动物进行形态观察和分子生物学检测。
异源抗体用于人体容易发生排异反应，若将动物抗体分子基因敲除，代之以人的抗体分子基因，那么人源抗体的产生将迎刃而解。根据上述材料回答下列问题：
（1）构建重组载体过程中，为使导人的目的基因能完成表达，需要在目的基因的首端和尾端各插入              ；
（2）上述过程中所需的胚胎通常通过供体获得，再将处理过的胚胎移植到受体内培养，则胚胎移植前要对供体和受体进行              处理，若想培养出多个性状表现一致的个体，可通过              技术；
（3）应用基因敲除技术可让动物生产人源抗体，通常可将从动物体内提取的细胞的抗体分子基因敲除，代之以人的抗体分子基因，然后将该细胞通过细胞融合技术与骨髓瘤细胞融合，再通过              、              等过程筛选出能产生人源抗体的细胞群，再在培养液或小鼠腹腔进行培养，从而获得所需抗体；
（4）用培养基筛选重组载体是否已击中细胞，方法之一是启动子缺失筛选法：原理是在重组载体的目的片段中插入一个启动子缺失的正向选择基因，同时目的基因片段也不包含该基因的启动子序列。若基因载体和细胞基因组发生同源重组，则正向选择基因可以在靶位点基因启动子的作用下得以表达，使阳性细胞具有G418抗性（G418是一种细胞毒性药物，对细胞有抑制或杀伤作用），从而从培养基中得到所需要的阳性克隆细胞，根据上述原理筛选导入成功的细胞的基本方法或过程是              。

基因疫苗是指将编码外源性抗原的基因导入人和动物体内,让其在宿主细胞中表达抗原蛋白，诱导机体产生免疫应答。某科研所计划培育具有口蹄疫免疫特性的高产奶牛。请回答下列问题：

（1）培育具有口蹄疫免疫特性的高产奶牛应用的工程技术有            。（写出2种）

（2）基因表达载体的构建是基因工程的核心，一个完整的基因表达载体至少包括目的基因、           、           、           等部分。  

（3）检测高产奶牛体内是否出现口蹄疫病毒的抗原蛋白，分子水平上的检测方法是从转基因牛中提取蛋白质，用相应的抗体进行                   ，如果出现杂交带，表明奶牛中出现了抗原蛋白。

（4）为提高胚胎的利用率，可采用        技术。由此可获得        相同的多个胚胎，应该选用                                         胚进行分割．

（5）胚胎工程的最后一道工序是                。