摘要:67.使用琼脂糖分离核酸时.琼脂糖的浓度一般在: ( ) A.-0.1% B.-1% C.-10% D.-50%

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CTAB法是一种从高等真核生物细胞中制备基因组DNA(总DNA)的技术。CTAB能跟核酸形成复合物,在高盐溶液(>0.7 mol/L的NaCl溶液)中可溶并且稳定存在,当降低溶液中盐的浓度(<0.3 mol/L的NaCl溶液),CTAB-核酸的复合物就会因溶解度降低而沉淀,再用70%酒精浸泡可洗脱掉CTAB;氯仿能使蛋白质发生变性而沉淀。提取和检测水稻基因组DNA的操作步骤如下:

①在50 ml离心管中加入20 ml CTAB抽提缓冲液(主要成分是1.4 mol/L的NaCl、2%的CTAB),于65℃水浴中预热;

②将20 g新鲜的水稻幼嫩叶片剪成小段后放于研钵中,用液氮速冻并研磨成粉末,加入上述离心管中,于65℃水浴中保温30 min;

③取出离心管中,冷却至室温,加入20 mL的氯仿,轻轻混匀20 min;

④在室温下以12000 r/min的转速离心10-20 min;

⑤将上清液移入另一个离心管中,加入2/3体积的经冷却的异丙醇,用玻璃棒轻轻搅动,小心取出聚集于玻璃棒上的CTAB-核酸的复合物沉淀;

⑥将沉淀移入另一个离心管中,加入70%乙醇洗涤,重复洗涤1-2次;

⑦吹干乙醇后,将DNA溶于适量的TE缓冲液中,在0.8%的琼脂糖凝胶上电泳分离并在核酸紫外检测仪上观察。

请回答下列问题:

(1)植物基因组DNA(总DNA)的提取通常采用机械研磨的方法,常温下研磨时,

植物细胞匀浆含有多种酶类对DNA的提取产生不利的影响。用液氮速冻,材料在研磨时易于破碎,同时还具有________________的作用。

(2)实验步骤③、④的目的是________________。

(3)实验步骤⑤中,玻璃棒上出现沉淀的主要原因是________________。

(4)对DNA进行定性检测常用的试剂是________。琼脂糖凝胶电泳是利用待分离样品中各种分子带电性质的差异以及________、________,使带电分子产生________而实现分离。DNA在260 nm的紫外线波段有一强烈的吸收峰,利用核酸紫外检测仪可以进行________。

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CTAB法是一种从高等真核生物细胞中制备基因组DNA(总DNA)的技术。CTAB能跟核酸形成复合物,在高盐溶液(>0.7 mol/L的NaCl溶液)中可溶并且稳定存在,当降低溶液中盐的浓度(<0.3 mol/L的NaCl溶液)时,CTAB-核酸的复合物就会因溶解度降低而沉淀,再用70%酒精浸泡可洗脱掉CTAB;氯仿能使蛋白质发生变性而沉淀。提取和检测水稻基因组DNA的操作步骤如下:

①在50 mL离心管中加入20 mL的CTAB抽提缓冲液(主要成分是1.4 mol/L的NaCl、2%的CTAB),于65℃水浴中预热;

②将20 g新鲜的水稻幼嫩叶片剪成小段后放于研钵中,用液氮速冻并研磨成粉末,加入上述离心管中,于65℃水浴中保温30 min;

③取出离心管,冷却至室温,加入20 mL的氯仿,轻轻混匀20 min;

④在室温下以12000 r/min的转速离心10~20 min;

⑤将上清液移入另一个离心管中,加入2/3体积的经冷却的异丙醇,用玻璃棒轻轻搅动,小心取出聚集于玻璃棒上的CTAB-核酸的复合物沉淀;

⑥将沉淀移入另一个离心管中,加入70%乙醇洗涤,重复洗涤1~2次;

⑦吹干乙醇后,将DNA溶于适量的TE缓冲液中,在0.8%的琼脂糖凝胶上电泳分离并在核酸紫外检测仪上观察。

请回答下列问题:

(1)植物基因组DNA(总DNA)的提取通常采用机械研磨的方法,常温下研磨时,植物细胞匀浆中含有的多种酶会对DNA的提取产生不利影响。用液氮速冻,材料在研磨时易破碎,同时还具有_______________________________。

(2)实验步骤③、④的目的是________________________________。

(3)实验步骤⑤中,玻璃棒上出现沉淀的主要原因是________________________________________________________________________

________________________________________________________________________。

(4)对DNA进行定性检测常用的试剂是________,琼脂糖凝胶电泳是利用待分离样品中各种分子带电性质的差异以及________、________,使带电分子产生________而实现分离。DNA在260 nm的紫外线波段有一强烈的吸收峰,利用核酸紫外检测仪可以进行________。

 

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