（14分）回答有关生物工程的问题：

（1）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生粘性末端，也可能产生__末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生_（相同不同）粘性末端的限制酶。

（2）利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是提供________特异性识别结合位点，驱动基因转录。在用表达载体转化大肠杆菌时，常用___处理大肠杆菌，以利于表达载体进入：为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与__________杂交，该杂交技术称为_________。

（3）如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的______中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将_____插入植物细胞的染色体___上。

(4)家蚕细胞具有高效表达外源基因能力。将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养，可以提取干扰素用于制药。为使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的_________和___________之间。

(5)采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞。改PCR反应体系的主要成分应该包含：扩增缓冲液（含Mg2+）、水，4种脱氧核糖苷酸、模板DNA、_____________和_________________。

(6)利用生物反应器培养家蚕细胞时，细胞会产生接触抑制。通常将多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反应器中，这样可以_________________增加培养的细胞数量，也有利于空气交换。

1．      (14分) 2009年10月，我国自主研发的转基因抗虫水稻“华恢1号”获得农业部颁发的安全证书。右图表示该抗虫水稻主要培育流程，据图回答：

(1)                      ④过程应用的主要生物技术是               。

(2)                      杀虫基因（crylA）是人们根据几种Bt毒蛋白的分子结构，设计并人工合成的，这属于           工程技术范畴。

(3)                      组建理想的载体需要对天然的质粒进行改造。下图是天然土壤农杆菌Ti质粒结构示意图（示部分基因及部分限制性内切酶作用位点），据图分析：

①人工改造时，要使抗虫基因表达，还应插入____________。

②人工改造时用限制酶Ⅱ处理，其目的是：第一，去除质粒上的            基因（填符号），保证T-DNA进入水稻细胞后不会引起细胞的无限分裂和生长；第二，使质粒带有单一限制酶作用位点，有利于___________的准确插入。第三，使质粒大小合适，可以提高转化效率等。

③若用限制酶Ⅰ分别切割改造过的理想质粒和带有抗虫基因的DNA分子，并构成重组Ti质粒。分别以含四环素和卡那霉素的培养基培养已成功导入抗虫基因的水稻胚细胞，观察到的细胞生长的现象是              。

(4)                      若限制酶Ⅱ切割DNA分子后形成的粘性末端为，则该酶识别的核苷酸序列是                 。

质粒能成功转入植韧细胞，并将质粒上的一部分外源DNA整合到植物的DNA中。 下图表示利用质粒进行转化获得抗除草剂大豆的过程。请据图分析回答：

（1）④过程应用的主要生物技术是       ，该技术的理论依据是       。关键步骤是利用含有一定营养和激素的培养基诱导植物细胞进行________和_________。
（2）过程②需要通过       使质粒与目的基因切口黏合。
（3）组建理想的载体需要对天然的质粒进行改造。下图是天然土壤农杆菌Ti质粒结构示意图（示部分基因及部分限制性内切酶作用位点），据图分析：

若用限制酶I分别切割改造过的理想质粒和带有抗除草剂基因的DNA分子，并构成重组Ti质粒。分别以含四环素和卡那霉素的培养基培养已成功导入抗虫基因的水稻胚细胞，观察到的细胞生长的现象是                                       _____________________________________________。
（4）若限制酶Ⅱ切割DNA分子后形成的粘性末端为序列，则该酶识别的核苷酸序列是                   

(8分)回答有关基因工程的问题：
(1)构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生黏性末端，也可能产生______末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生______(相同、不同)黏性末端的限制酶。
(2)利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是提供              特异性识别结合位点驱动基因转录。在用表达载体转化大肠杆菌时，常用______处理大肠杆菌，以利于表达载体进入；为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为__        ___。为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成___   ___，常用抗原—抗体杂交技术。
(3)如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的　　中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的    _上。

一位科学家正在使用氨苄青霉素敏感型菌株进行研究，该菌株不能利用乳糖，这是因为它的乳糖操纵基因异常。该科学家有两种质粒，一种含有正常的乳糖操纵基因，另一种含有氨苄青霉素抗性基因。她运用限制酶和DNA连接酶，获得了一些含有这两个基因的重组质粒。然后在一个仅以葡萄糖为唯一能源的培养基中培养该细菌，并向其中加入高浓度的重组质粒。使细菌增殖。再将实验组细菌（含重组质粒）和对照组细菌（不含重组质粒）放入下表所示环境中让其生长。请回答下列问题：