研究人员利用基因工程技术对肺癌的治疗进行了大量研究，肺部细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图所示，据图回答

1.在基因工程中通常选择细菌质粒作为载体，原因是                          ；如果某质粒由100 0个脱氧核苷酸组成，脱氧核苷酸平均分子量为a,则该质粒的质量为        。

2.图甲中在构建重组载体时，酶切目的基因和酶切质粒时，所用的限制酶可以不同，但是产生的粘性末端必须是                。

3.图甲中在将酶切后的目的基因导入到酶切后的质粒上时需要的酶是              ， 图乙中let-7基因转录过程需要的酶是    ，这 两种酶作用的化学键都是          。

4.EcoR I限制酶只能识别序列一GAATTC一，并只能在G与A之间切割。若在某目的基因的两侧各有1个EcoR I的切点，请画出目的基因两侧被限制酶EcoR I切割后所形成的黏性末端。                      

5.原代培养是是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。原代培养随着培养时间的延长和细胞不断分裂，空间因素和营养因素会限制其进一步生长。此时就需要将培养物分割成小的部分（组织细胞分散开），重新接种到另外的培养器皿内再进行培养，这个过程就称为传代或者再培养。图甲中进行传代培养操作时，需要用　　 　　酶处理贴附在原代培养培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。

6.研究发现，let-7基因能影响RAS基因的表达，其影响机理如图乙所示。从分子水平的角度分析，其作用机理是　　                               　    　。

7.下图所示pBR322是目前常用的人工质粒载体。如果将BamHI处理后的pBR322质粒与用BgIⅡ处理得到的目的基因进行重组，并将重组质粒导入原本无amp^R和tet^R  的大肠杆菌进行培养。为了检测重组质粒是否成功导入大肠杆菌，现将上述大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图二的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图三的结果(空圈表示与图二对照无菌落的位置)。与图三空圈相对应的图二中的菌落表现型是___       _____ ，图三结果显示，多数大肠杆菌内导入的是___            __。

3．(8分)(上海卷)分析有关基因表达的资料，回答问题。取同种生物的不同类型细胞，检测其基因表达，结果如图。

(1)基因1～8中有一个是控制核糖体蛋白质合成的基因，则该基因最有可能是基因______。

(2)上图所示细胞中功能最为近似的是细胞______。

A．1与6　　　　　　　　      B．2与5

C．2与3                                   D．4与5

(3)判断图中细胞功能近似程度的依据是____________________。

(4)现欲研究基因1和基因7连接后形成的新基因的功能，导入质粒前，用限制酶切割的正确位置是______。

(5)如图是表达新基因用的质粒的示意图，若要将新基因插入到质粒上的A处，则切割基因时可用的限制酶是______。

A．HindⅢ                                 B．EcoRⅠ

C．EcoB                                     D．PstⅠ

(6)新基因与质粒重组后的DNA分子导入受体细胞的概率很小，因此需进行______，才能确定受体细胞已含有目的基因。

(7)在已确定含有目的基因的受体细胞中，若质粒的抗青霉素基因缺失了两个碱基，将这样的受体细胞接种到含有青霉素的培养基上，该细胞中可能出现的结果是______(多选)。

A．抗青霉素基因不能转录      B．基因1和7没有表达

C．基因1和7不能连接         D．质粒上的酶切位置发生改变

下表是四种植物分生组织的细胞周期，有关叙述正确的是        （　　）

A．四种分生组织都能产生吲哚乙酸，促进其细胞生长

B．秋水仙素作用于b时期中的细胞，能使其染色体数目加倍

C．最好选用物种1观察有丝分裂过程，因其细胞周期最短

D．a时期细胞核中进行转录和翻译，b时期可观察到染色体

52．（9分，每空1分）分析实验，回答问题

中学实验室所做 “秋水仙素诱导染色体数目变化” 实验，在显微镜下观察只能看到染色体数目的增加，但增加的具体数目不容易确定。为了确定染色体的增加数目，有人对该实验的实验步骤进行改进，补充实验步骤并分析回答问题。

实验步骤：

（1）生根：将洋葱放在广口瓶上，瓶内装满清水，让洋葱的底部接触到瓶内的水面，把这个装置放在温暖的地方，注意经常换水。

（2）分组：待不定根长到2cm左右，实验分为2组，一组作为对照组在室温下继续培养，一组转到一定浓度的秋水仙素溶液中处理2天。可见实验组根尖　 ，出现此现象的原因是_______________________________

（3）取材并酶解：分别剪取上述2种条件下培养的根尖2—3mm，将其浸入一定浓度的　　　 　　　　　　酶溶液中，处理3h，去掉细胞壁。此时若用显微镜观察，细胞呈　　　　　　 形。

（4）低渗处理：倒去酶液后水洗根尖2~3次，用蒸馏水浸泡30min，目的是使细胞　　　　　　　　　　　 ，染色体分散。

（5）固定后制备悬浮液：将低渗处理的根尖放在卡诺氏固定液中固定后，用机械方法磨碎根尖，制成根尖细胞悬浮液。

（6）染色、制片：吸取细胞悬浮液滴在载玻片上，在酒精灯火焰上烤1分钟，然后用石炭酸—品红试剂染色，制成临时装片并观察。火烤的目的除了将细胞固定在载玻片上外，还能__________，利于染色。使用的石炭酸—品红试剂是___(酸或碱）性试剂。

（7）观察：在显微镜下看到结果如下图1和图2。

①只能在实验组中观察到的图像是_____________

②一位同学在实验组的观察中，视野中既有图1的细胞又有图2的细胞，试分析原因________________________________________________________________