Question

【题目】用噬菌体抗体库技术获得人的单克隆抗体的方法是：将人抗体基因插入噬菌体载体，然后让该噬菌体感染大肠杆菌，抗体可能和噬菌体蛋白以融合蛋白的形式附着在噬菌体表面，也可能通过大肠杆菌分泌出去。回答下列问题：

（1）获取人抗体基因时，可从人的_________细胞中获取总RNA，反（逆）转录成cDNA，再通过PCR技术扩增抗体基因。在PCR反应体系中，需加入________作为合成DNA的原料。

（2）在抗体基因与噬菌体基因之间设计了一个终止密码子（UAA或UAG或UGA）的对应序列，在终止密码子突变型的菌株表达时，抗体基因的表达产物是_______（填“融合蛋白”或“分泌型抗体”）。

（3）下图表示噬菌体抗体库中编码某抗体的mRNA的部分碱基序列：

图中虚线框内mRNA片段包含__________个密码子，如虚线框后的序列未知，预测虚线框后的第一个密码子最多有________种。

（4）在噬菌体抗体库的构建过程中，理论上可以不利用Ca2+处理大肠杆菌，依据是___________。与利用杂交瘤技术生产的单克隆抗体相比，用该技术省去的步骤是__________，使制备更简单易行。从噬菌体抗体库中筛选特异性抗体的方法是__________。

Answer 1

【答案】浆 四种脱氧核苷酸 融合蛋白 8 13 噬菌体可以侵染大肠杆菌，将重组DNA分子注入大肠杆菌 动物细胞融合（或已免疫的B细胞与骨髓瘤细胞融合或浆细胞与骨髓瘤细胞融合） 抗原—抗体杂交（法）

【解析】

本题主要考查基因工程和细胞工程与单克隆抗体制备的相关知识，要求学生熟知基因工程的操作过程、以及单克隆抗体的制备的过程，旨在考查考生的理解能力与知识的综合运用能力。

（1）抗体基因在效应B细胞（浆细胞）中表达，故应从人的浆细胞中获取总RNA，反（逆）转录成cDNA，再通过PCR技术扩增抗体基因；DNA的原料为四种脱氧核苷酸；

（2）在抗体基因与噬菌体基因之间设计了一个终止密码子（UAG）的对应序列，终止密码子为翻译的终点，由于终止密码子突变型菌株转录的产物无原来设计的终止密码子，因此抗体基因的表达产物是融合蛋白（抗体和噬菌体的蛋白质）；

（3）mRNA上三个相邻碱基为一个密码子，故图中虚线框内mRNA片段包含8个密码子；该片段后面的第一个碱基为U，所以后面的密码子最多可能为4×4=16种，根据题干信息及题中给出的mRNA序列可知，虚线框后第一个密码子不可能是终止密码子，故实际上最多有16-3=13种密码子；

（4）Ca2+处理大肠杆菌的目的是使大肠杆菌易于吸收周围环境中的DNA分子，但由于噬菌体可以侵染大肠杆菌，可将重组DNA分子注入大肠杆菌，因此在噬菌体抗体库的构建过程中，理论上可以不利用Ca2+处理大肠杆菌；利用杂交瘤技术生产的单克降抗体，需要对骨髓瘤细胞和B淋巴细胞进行融合，然后筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，但用噬菌体抗体库技术获得人的单克隆抗体省去了动物细胞融合环节，使制备更简单易行；从噬菌体抗体库中筛选特异性抗体的方法是抗原—抗体杂交（法）。