Question

下图是利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程示意图，请据图作答。

（1）能否利用人的皮肤细胞来完成①过程？     。

原因是                                                    。

（2）过程②称为                   。

（3）为使过程⑧更易进行，可用      处理D。

（4）下图为上图中质粒B的简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，amp^R为青霉素抗性基因，tct^R为四环素抗性基因，P为启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。

①将上述连接产物导入无任何抗药性的大肠杆菌细胞中然后接种到含青霉素的培养基中，能生长的大肠杆菌所含有的连接产物是                         。（2分，）

②在上述实验中，为了防止目的基因和质粒在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是                 。

（5）若要使A在体外通过③④⑤过程扩增，那么在此过程中所使用的酶是             。（2分）除酶外还需要加入引物，其作用是                                 。（2分）

 

Answer 1

【答案】

（1）不能 皮肤细胞中的胰岛素基因未表达（或未转录），不能形成胰岛素mRNA

（2）反转录（逆转录）   （3）Ca²⁺ （4）① 目的基因--质粒连接物、质粒--质粒连接物 （2分，答对一个只给一半分）     ②EcoRI和BamHI （2分）

（5）耐热DNA聚合酶（2分）

使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸（2分） 

【解析】

试题分析：皮肤细胞中的胰岛素基因未表达不能形成胰岛素mRNA，所以不能用人的皮肤细胞来通过反转录的方法获取目的基因，用Ca²⁺处理受体细胞后有利于基因表达载体的导入。目的基因与质粒结合后有三种产物：目的基因--质粒连接物、质粒--质粒连接物、目的基因——目的基因，其中含有青霉素抗性基因的是目的基因--质粒连接物、质粒--质粒连接物。用EcoRI和BamHI酶切后产生的末端不同，可以防止末端发生任意连接。PCR技术用到的酶是耐热DNA聚合酶，引物作用是使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸。

考点：基因工程

点评：本题考察了学生的理解分析能力，难度较大，解题的关键是理解目的基因与质粒结合时有三种情况。