题目内容
【题目】来源于某种野生植物的A基因表达出的多肽对多种致病微生物具有杀灭作用，将A基因导入油菜可显著提高油菜的抗病能力。
（1）下图是含目的基因A的DNA分子，利用PCR技术扩增A基因的前提，是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成___________。PCR—般要经历三十多次循环，在第3轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段，这种DNA片段所占的比例为___________。
（2）通过SmaⅠ酶切割扩增后的DNA分子和质粒，利用___________酶连接切割后的DMA分子和质粒，将A基因插入质粒的启动子和终止子之间，构建___________。
（3）利用农杆菌转化法将A基因导入经___________形成的油菜愈伤组织细胞，在愈伤组织进一步培养过程中，MS培养基各成分用量减半，并添加质量浓度为0.15mg/L的奈乙酸（NAA），目的是有利于________的分化。
（4）经检测，转入完整A基因的某些植物不能正确表达多肽，从A基因与质粒连接形成重组质粒的角度分析，最可能的原因是_________________________________。
【答案】 引物 1/4 DNA连接 （基因）表达载体 脱分化（去分化） 根 部分A基因与质粒反向连接
【解析】试题分析：根据题干信息可知，本题涉及到基因工程的基本步骤的考查，其中A基因为目的基因，表达产物可以控制显著提高油菜的抗病能力；常用PCR技术扩增目的基因；基因工程常用的工具酶有限制酶和DNA连接酶；将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法。
（1）在PCR技术扩增目的基因的过程中，要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物；第3轮循环获得8个DNA片段，其中两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段有2个，因此在第3轮循环产物中两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段所占的比例为1/4。
（2）在构建基因表达载体时，应该先用限制酶切割含目的基因的DNA分子和质粒，再用DNA连接切割后的DMA分子和质粒，连接成重组质粒。
（3）油菜的愈伤组织细胞是经过脱分化形成的；在愈伤组织进一步培养过程中，MS培养基各成分用量减半，并添加质量浓度为0.15mg/L的奈乙酸（NAA），目的是有利于根的分化。
（4）转入完整A基因的某些植物不能正确表达多肽，从A基因与质粒连接形成重组质粒的角度分析，最可能的原因是部分A基因与质粒反向连接。
