题目内容
【题目】白僵菌可感染农业害虫，常作为防治害虫的菌剂。由于白僵菌对除草剂草丁膦敏感，且杀死害虫的能力较弱，科研人员将Bar基因（抗除草剂基因）和毒蛋白基因导入白僵菌进行基因工程改造，流程如图所示：
（1）从苏云金芽孢杆菌中获取的毒蛋白基因，通过____技术可在体外大量扩增。该扩增过程需要____种引物，所需添加的酶是____。
（2）图中形成重组质粒1过程需要的限制酶是____；形成重组质粒2除了需要限制酶 XbaⅠ外，还需要____。
（3）将重组质粒2导入经____处理成为感受态的白僵菌。一段时间后用含有____的平板培养基进行筛选，获得含有Bar基因的重组白僵菌。
（4）科研人员将重组白僵菌喷涂于植物叶片上，以此饲喂饥饿处理的害虫，记录单位时间内的____，以判断重组白僵菌的杀虫效果。
【答案】 PCR 两 热稳定DNA聚合酶（Taq酶） Nco I、 BamH I DNA连接酶 Ca2+ 草丁膦 死亡害虫数
【解析】试题分析：分析图解：图中首先利用NcoI、BamHI两种限制酶切割目的基因和质粒，然后再用DNA连接酶形成重组质粒，利用两种限制酶可以防止目的基因和质粒自身连接；然后再利用XbaI酶分别切割重组质粒1和Bar基因，再构建重组质粒2。
（1）根据题意可知，可以用PCR技术体外获得大量毒蛋白基因片段，该扩增过程需要2种引物与两条母链配对，并需要热稳定性DNA聚合酶，因为扩增的第三步需要加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。
（2）据图分析，毒蛋白基因两端是NcoI、BamHI作用位点，因此需要NcoI、BamHI将毒蛋白基因和质粒切割，另需要DNA连接酶连接，获得重组质粒l。
（3）将重组质粒2与用钙离子处理处于感受态的白僵菌菌液混合进行转化，重组质粒2在白僵菌细胞内被修复．一段时间后用含有草丁膦的平板培养基进行筛选，获得含有Bar基因的重组白僵菌。
（4）科研人员将重组白僵菌喷涂于植物叶片上，以此饲喂饥饿处理的害虫，记录单位时间内的死亡害虫数，以判断重组白僵菌的杀虫效果。
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