题目内容
【题目】科研人员利用基因工程、细胞工程、胚胎工程等培育出了乳汁中含有人凝血因子Ⅸ医用蛋白的二倍体转基因绵羊，简易流程如图所示。请回答下列问题：
（1）图中①过程为基因工程的核心步骤，该步骤用到的工具有_____________。该步骤得到的“A”中应具有一些特殊的DNA片段，其中_____________用于②过程。
（2）进行图中③过程前，卵母细胞要进行去核处理的原因是__________________________。
（3）为了获得绵羊胎儿的单个成纤维细胞，_________（填“能”或“不能”）使用胃蛋白酶处理绵羊组织块，理由是_________________________。
（4）图中④过程所用培养液的成分比较复杂，除一些无机盐和有机盐，还需添加_____________（答出三种即可）。
（5）在进行图中⑤过程前_________（填“需要”或“不需要”）进行性别鉴定，理由是_____________。
【答案】 限制酶、DNA连接酶、载体 标记基因 保证二倍体转基因绵羊的核遗传物质全部来自含有目的基因的成纤维细胞 不能 胃蛋白酶的最适pH为2.0左右，在接近中性的环境中胃蛋白酶基本没有活性 维生素、激素、氨基酸、核苷酸、动物血清 不需要 胎儿成纤维细胞来自雌绵羊，最终获得的转基因绵羊均为雌性
【解析】试题分析：根据图中能分泌人凝血因子Ⅸ医用蛋白的二倍体转基因绵羊的培育流程分析，①为目的基因（人凝血因子Ⅸ基因）构建的基因表达载体，②为鉴定筛选含目的基因的成纤维细胞，③为含目的基因的细胞（核）与去核卵细胞形成重组细胞，④表示利用早期胚胎培养技术培养重组胚胎，⑤是通过胚胎移植技术完成对早期胚胎的移植。据此分析各小题：
（1）图中①过程为基因表达载体的构建，涉及对载体的切割和目的基因与载体的连接，所以该步骤用到的工具有限制酶、DNA连接酶、载体。该步骤得到的“A”即构建的基因表达载体，为了便于鉴定并筛选受体细胞（成纤维细胞）是否含有目的基因，需要在构建的重组载体中含有标记基因。
（2）为了保证③过程得到的重组细胞中含有的核遗传物质全部来自二倍体转基因绵羊，所以对移植用的卵母细胞要进行去核处理。
（3）为了获得绵羊胎儿的单个成纤维细胞，应该用胰蛋白酶或胶原蛋白酶对绵羊组织块进行处理，而不能使用胃蛋白酶处理，因为胃蛋白酶的最适pH为2.0左右，它在接近中性的环境中胃蛋白酶基本没有活性；如果将处理环境的pH变为2.0，则获得的成纤维细胞的生理活性又会受到严重影响。
（4）图中④过程是早期胚胎的培养过程，除一些无机盐和有机盐外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸和动物血清等。
（5）根据子代个体的性别由重组细胞核内性染色体决定，由于该重组细胞的细胞核来自于雌性绵羊的体细胞，所以细胞内含有XX性染色体组成，最终发育的转基因绵羊一定是雌性，所以在进行图中⑤胚胎移植前不需要进行性别鉴定。
