Question

【题目】利用基因工程等生物工程技术，可从转基因奶山羊乳汁中分离获得人凝血因子Ⅳ，用于血友病的治疗。请回答下列问题：

（1）目的基因的获取方法不是唯一的，若以mRNA为材料人工合成获得凝血因子Ⅳ基因。其具体方法是___________，构建的基因表达载体应该包括启动子，终止子、____________等。

（2）将含有目的基因的表达载体导人奶山羊受精卵后，需要进行鉴定和检测来确定基因的表达情况。检测奶山羊乳汁中是否含有人凝血因子Ⅳ，可采用__________法。除了分子检测外，有时还需要进行________水平的鉴定。

（3）已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。在DNA连接酶的作用下构建重组质粒，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端_________ （填“能”或“不能”）连接，理由是_____________。

（4）若最终转基因奶山羊乳汁中成功表达出人凝血因子Ⅳ，其中涉及的生物技术有___________________

Answer 1

【答案】在逆转录酶的作用下，以mRNA为模板按照碱基互补配对的原则合成目的基因 目的基因和标记基因 抗原—抗体杂交 个体生物学 能 因为由这两种不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的 基因工程，动物细胞培养，早期胚胎培养，胚胎移植等

【解析】

基因工程是现代生物科技中的热点。基因工程又叫做基因拼接技术或DNA重组技术，按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。

基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）通过mRNA人工合成获得凝血因子Ⅳ基因，其具体方法是在逆转录酶的作用下，以mRNA为模板按照碱基互补配对的原则合成目的基因，构建的基因表达载体应该包括启动子，终止子、目的基因和标记基因等。

（2）检测目的基因是否已转录出了mRNA，可采用分子杂交技术．若要检测羊乳汁中是否含人凝血因子Ⅳ，需用抗原-抗体杂交法，若有杂交带出现，表明目的基因已形成蛋白质产品，了分子检测外，有时还需要进行个体生物学水平的鉴定。

（3）分析可知，限制性内切酶I和限制性内切酶Ⅱ切割形成的粘性末端相同，故在DNA连接酶的作用下，该两种限制酶切割后形成的黏性末端能连接。

（4）若最终转基因奶山羊乳汁中成功表达出人凝血因子Ⅳ，其中涉及的生物技术有基因工程，动物细胞培养、早期胚胎培养，胚胎移植等。