题目内容
【题目】基础知识检测
(1)绘制单克隆抗体的制备流程,标明重要的步骤名称。(_______)
(2)补充绘制完整第一轮PCR过程:补充各步骤名称和温度、绘制第一轮的产物;绘制第二轮PCR结束后所有产物分子(标出引物A和引物B的位置和5'、3'方向)。(______)
【答案】
【解析】试题分析:单克隆抗体的制备流程可以参考课本中图解流程进行文字化表述。PCR技术的步骤:(1)DNA变性(90℃-96℃):双链DNA模板在热作用下,氢键断裂,形成单链DNA;(2)退火(复性)(40℃-65℃):系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链;(3)延伸(68℃-75℃):在taq酶(在72℃左右最佳的活性)的作用下,以dNTP为原料,从引物的5′端→3′ 端延伸,合成与模板互补的DNA链。每一循环经过变性、退火和延伸,DNA含量既增加一倍。
(1)给动物注射特定抗原→提取已免疫的B淋巴细胞
提取同种动物的骨髓瘤细胞→诱导二者融合为杂交细胞→筛选并克隆化培养既能迅速增殖,又能产生所需抗体的杂交瘤细胞→进行体外培养杂交瘤细胞或者植入动物体内培养杂交瘤细胞→提取所需的单克隆抗体。
(2)结合前面的分析可知,由于DNA的两条链是反向的,在引物结合与延伸时,二者也表现为方向是相反的。根据已知图解中两条模板链上结合的引物位置为起点,第一轮:以5′端→3′端为模板链的子链延伸方向为从右向左;以3′端→5′端为模板链的子链延伸方向则是从左向右。第二轮:以原母链的两条链为模板的引物结合部位和延伸方向与第一轮相同,以第一轮得到的含引物A的子链为模板则在另一端结合引物B从左向右延伸,而以第一轮得到的含引物B的子链为模板则在另一端结合引物A从右向左延伸(见参考答案图示)
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