题目内容

【题目】【加试题】卡那霉素和头孢霉素都有抗菌作用,此外,卡那霉素对葡萄细胞有抑制作用。研究人员将Barnase基因雄性不育基因转入葡萄细胞,利用卡那霉素和头孢霉素,通过植物克隆方法成功培育出大粒、无核的葡萄新品种。请回答:

1构建含Barnase基因、β―葡糖苷酸酶基因和卡那霉素抗性基因的重组质粒,导入农杆菌,在固体培养基中培养形成 以便鉴定是否混有杂菌,再用 将农杆菌转移至LB 培养基中进行扩大培养。构建重组质粒需要用到的工具酶是

2将经过 的幼嫩葡萄叶片切成小块,浸入农杆菌悬浮液中,4分钟后取出此时已有较多农杆菌附着在叶片小块上并接种到固体培养基中。培养至第3天时,可以看到在叶片小块周围出现 和大量菌落。这时再用头孢霉素处理叶片小块,其目的是 A.抑制葡萄细胞脱分化 B.促进葡萄细胞再分化 C.杀灭农杆菌 D.促进农杆菌生长

3将叶片小块放入卡那霉素培养基中培养一段时间后,转移至生芽培养基,待其长出 后,再转移至生根培养基中继续培养形成试管苗。卡那霉素培养基起着 作用,植物克隆的技术基础是

4在卡那霉素培养基中,由于转化细胞对周围的非转化细胞有保护作用,获得的试管苗中可能存在假的转基因试管苗,因此还需对试管苗的 基因的表达产物进行生化检测,才能鉴别出真正的转基因试管苗。

5最后,对转基因试管苗还需进行逐渐 湿度的锻炼,使之适应自然环境。

【答案】

1单菌落 接种环 液体 限制性核酸内切酶 DNA连接酶

2消毒 愈伤 C2分

3丛状苗 筛选 植物组织培养

4 β―葡糖苷酸酶

5降低

【解析

1构建含Barnase基因、β―葡糖苷酸酶基因和卡那霉素抗性基因 的重组质粒,导入农杆菌,在固体培养基中培养形成单菌落以便鉴定是否混有杂菌,再用接种环将农杆菌转移至LB液体培养基中进行扩大培养。构建重组质粒需要用到的工具酶是限制性核酸内切酶 、DNA连接酶。

2将经过消毒的幼嫩葡萄叶片切成小块,浸入农杆菌悬浮液中,4分钟后取出此时已有较多农杆菌附着在叶片小块上 并接种到固体培 养基中。培养至第3天时,可以看到在叶片小块周围出现愈伤和大量菌落。这时再用头孢霉素处理叶片小块,其目的是杀灭农杆菌。

3将叶片小块放入卡那霉素培养基中培养一段时间后,转移至生芽培养基中,待其长出丛状苗后,再转移至生根培养基中继续培养形成试管苗。卡那霉素培养基起着筛选作用,植物克隆的技术基础是植物组织培养。

4在卡那霉素培养基中,由于转化细胞对周围的非转化细胞有保护作用,获得的试管苗中可能存在假的转基因试管苗,因此还需对试管苗的β―葡糖苷酸酶基因的表达产物进行生化检测,才能鉴别出真正的转基因试管苗。

5最后,对转基因试管苗还需进行逐渐降低湿度的锻炼,使之适应自然环境。

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