题目内容
【题目】【加试题】卡那霉素和头孢霉素都有抗菌作用，此外，卡那霉素还对葡萄细胞有抑制作用。研究人员将Barnase基因（雄性不育基因）转入葡萄细胞，利用卡那霉素和头孢霉素，通过植物克隆方法成功培育出大粒、无核的葡萄新品种。请回答：
（1）构建含Barnase基因、β―葡糖苷酸酶基因和卡那霉素抗性基因的重组质粒，导入农杆菌，在固体培养基中培养形成 以便鉴定是否混有杂菌，再用 将农杆菌转移至LB 培养基中进行扩大培养。构建重组质粒需要用到的工具酶是 、 。
（2）将经过 的幼嫩葡萄叶片切成小块，浸入农杆菌悬浮液中，4分钟后取出（此时已有较多农杆菌附着在叶片小块上）并接种到固体培养基中。培养至第3天时，可以看到在叶片小块周围出现 和大量菌落。这时再用头孢霉素处理叶片小块，其目的是 （A．抑制葡萄细胞脱分化 B．促进葡萄细胞再分化 C．杀灭农杆菌 D．促进农杆菌生长）。
（3）将叶片小块放入卡那霉素培养基中培养一段时间后，转移至生芽培养基中，待其长出 后，再转移至生根培养基中继续培养形成试管苗。卡那霉素培养基起着 作用，植物克隆的技术基础是 。
（4）在卡那霉素培养基中，由于转化细胞对周围的非转化细胞有保护作用，获得的试管苗中可能存在假的转基因试管苗，因此还需对试管苗的 基因的表达产物进行生化检测，才能鉴别出真正的转基因试管苗。
（5）最后，对转基因试管苗还需进行逐渐 湿度的锻炼，使之适应自然环境。
【答案】
（1）单菌落 接种环 液体 限制性核酸内切酶 DNA连接酶
（2）消毒 愈伤 C（2分）
（3）丛状苗 筛选 植物组织培养
（4） β―葡糖苷酸酶
（5）降低
【解析】
（1）构建含Barnase基因、β―葡糖苷酸酶基因和卡那霉素抗性基因 的重组质粒，导入农杆菌，在固体培养基中培养形成单菌落以便鉴定是否混有杂菌，再用接种环将农杆菌转移至LB液体培养基中进行扩大培养。构建重组质粒需要用到的工具酶是限制性核酸内切酶 、DNA连接酶。
（2）将经过消毒的幼嫩葡萄叶片切成小块，浸入农杆菌悬浮液中，4分钟后取出（此时已有较多农杆菌附着在叶片小块上） 并接种到固体培 养基中。培养至第3天时，可以看到在叶片小块周围出现愈伤和大量菌落。这时再用头孢霉素处理叶片小块，其目的是杀灭农杆菌。
（3）将叶片小块放入卡那霉素培养基中培养一段时间后，转移至生芽培养基中，待其长出丛状苗后，再转移至生根培养基中继续培养形成试管苗。卡那霉素培养基起着筛选作用，植物克隆的技术基础是植物组织培养。
（4）在卡那霉素培养基中，由于转化细胞对周围的非转化细胞有保护作用，获得的试管苗中可能存在假的转基因试管苗，因此还需对试管苗的β―葡糖苷酸酶基因的表达产物进行生化检测，才能鉴别出真正的转基因试管苗。
（5）最后，对转基因试管苗还需进行逐渐降低湿度的锻炼，使之适应自然环境。
