题目内容
【题目】枇杷食用、药用价值高，但不耐储存和运输。科研人员以枇杷为原料，通过筛选优良酿酒酵母，制备枇杷果酒，实验步骤如下。请回答下列问题：
（1）步骤1：将枇杷果皮和果园土壤匀浆放入三角瓶中，适度稀释后放入YPD液体培养基培养，28℃摇床培养24小时。推测该步骤的主要目的是_____________。
（2）步骤2：将培养好的菌液稀释为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-65个梯度，每个梯度至少设计_________个重复，用________法将0.1ml稀释液接种到TTC平板培养基上，28℃_________（填“静置”或“摇床”）培养2天。经统计，发现稀释梯度为10-5的平板上平均有40个单菌落，由此可计算出每毫升菌液有________个微生物。其中有产酒精能力的酵母在TTC平板上显红色，从用途上来看TTC平板属于________培养基。
（3）步骤3：将筛选出的酿酒酵母经扩大培养后，分别接种到等量的枇杷汁中，密闭培养，每隔2h观察各菌株的___________，筛选出发酵能力强的酿酒酵母。还可根据乙醇与______________试剂反应呈现灰绿色，来检验酒精的产生。
【答案】增加酿酒酵母的数量 3 涂布平板 静置 4×107 鉴别 产气量 酸性重铬酸钾
【解析】
1、微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
2、培养基按照用途分类包括基本培养基、选择培养基和鉴别培养基。
（1）依据题干信息，“将枇杷果皮和果园土壤放入YPD液体培养基培养”可知，进行选择培养和液体培养目的是增加酿酒酵母的数量。
（2）进行酵母菌菌落计数采用的接种方法是稀释涂布平板，此方法遵循平行重复原则，一般将每个梯度设置至少3个重复，涂布后平板要倒置静置培养。根据稀释梯度为10-5的平板上平均有40个单菌落，由此可计算出每毫升菌液有40÷0.1×105=4×107个微生物。根据酵母菌在在平板上的颜色鉴定有产酒能力的酵母，可知TTC平板属于从功能上分类属于鉴别培养基。
（3）酵母菌无氧呼吸会产生酒精和二氧化碳，因此可观察菌株的产气量来筛选出发酵能力强的酿酒酵母。酒精的鉴定可用酸性的重铬酸钾，颜色变化为橙色变为灰绿色。
