Question

【题目】转基因抗病香蕉的培育过程如图所示。质粒上有Pst Ⅰ、Sma Ⅰ、EcoR Ⅰ、Apa Ⅰ等四种限制酶切割位点。请回答：

（1）构建含抗病基因的表达载体A时，应选用限制酶____________ ，对__________进行切割。而后用___________酶处理。获得重组质粒A。

（2）将重组质粒A与农杆菌混合后，应首先用________处理使其成为________细胞。

（3）培养基中的卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长，欲利用该培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，应使基因表达载体A中含有_________，作为标记基因。

（4）香蕉组织细胞具有________，因此，可以利用____________技术将导入抗病基因的香蕉组织细胞培育成植株。图中①、②依次表示组织培养过程中香蕉组织细胞的________和___________，B表示__________。

（5）若要鉴定抗病基因是否翻译成蛋白质，可采用_______________检测。

Answer 1

【答案】 PstI、EcoRI 质粒和含抗病基因的DNA DNA连接酶 钙离子 感受态 抗卡那霉素基因 全能性 植物组织培养 脱分化 再分化 愈伤组织 抗原—抗体杂交技术

【解析】【试题分析】

本题结合转基因抗病香蕉的培育过程图，考查基因工程和植物组织培养技术的相关知识，要求考生识记基因工程的具体操作步骤；识记植物组织培养的原理和过程，能准确判断图中各过程的名称，再结合所学的知识准确答题。分析题图：含抗病基因的DNA含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ的切割位点，其中SmaⅠ酶的切割位点位于抗病基因（目的基因）上；质粒含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ的切割位点，所以要获得重组质粒，可以用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ进行切割。①表示脱分化过程、②表示再分化过程、B表示愈伤组织。

（1）含抗病基因的DNA上含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ的切割位点，但限制酶SmaⅠ的切割位点位于抗病基因上，用SmaⅠ位点进行切割会破坏抗病基因的结构，所以要获得抗病基因，不能用限制酶SmaⅠ对图中对应的位点进行切割。要获得含抗病基因的重组质粒，应选用PstⅠ、EcoRⅠ限制酶切割质粒和含目的基因的外源DNA分子。而后用DNA连接酶处理，获得重组质粒A。

（2）将重组质粒A与农杆菌混合后，应首先用钙离子处理使其成为感受态细胞。

（3）培养基中的卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长，欲利用该培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，应使基因表达载体A中含有抗卡那霉素基因，作为标记基因。

（4）香蕉组织细胞具有全能性，因此，可以利用植物组织培养技术将导入抗病基因的香蕉组织细胞培育成植株。图中①、②表示脱分化过程、②表示再分化过程，B表示愈伤组织。

（5）若要鉴定抗病基因是否翻译成蛋白质，可采用抗原—抗体杂交技术检测。