题目内容
【题目】图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，且限制酶的切点是唯一的，外源DNA插入会导致相应的基因失活，请回答下列问题。
（1）基因工程中最常用的载体是_______，而作为基因表达载体，除图1所示结构外，还需具有___________________________。
（2）根据图中所给信息，构建基因表达载体时，应选用的限制酶是__________________。若将基因表达载体导入大肠杆菌，一般用____________处理，使其处于_____________，以利于吸收周围环境中的DNA分子。
（3）为了筛选含目的基因的大肠杆菌，应在培养基中添加______________，培养一段时间后，平板上长出的菌落，用PCR技术鉴定时，所用的引物组成为图2中_____________。
【答案】质粒 目的基因和终止子 BclI和HindⅢ Ca2+ 感受态 四环素 引物甲和引物丙
【解析】
本题考查基因工程，考查对基因工程的工具和操作步骤的理解和识记。图1中氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因为标记基因，根据目的基因两端限制酶的酶切位点和标记基因中的酶切位点可选择适宜的限制酶，保证基因表达载体中至少一个标记基因正常表达。
（1）质粒是基因工程中最常用的载体，作为基因表达载体，一般应具有启动子、终止子、目的基因和标记基因，图1结构中缺少目的基因和终止子。
（2）根据图中所给信息，两个标记基因中均含有BamHⅠ的酶切位点，因此构建基因表达载体时，不能选用该酶，应选用BclI和HindⅢ。将基因表达载体导入大肠杆菌，一般用Ca2+处理，增大其细胞壁的通透性，使其处于感受态，以利于吸收周围环境中的DNA分子。
（3）基因表达载体中，目的基因的插入导致氨苄青霉素抗性基因失活，但四环素抗性基因可以正常表达，筛选含目的基因的大肠杆菌，可在培养基中添加四环素。用PCR技术鉴定受体菌是否含有目的基因，所用的引物应分别与目的基因两端的单链配对，引物应为图2中的引物甲和引物丙。
【题目】科学家为了探究影响细胞衰老的因素，进行了如下实验。实验Ⅰ：分别在相同的条件下，体外培养胎儿、中年人和老年人的肺成纤维细胞，结果如表所示。
细胞来源 | 胎儿 | 中年人 | 老年人 |
增殖代数 | 50 | 20 | 2~4 |
实验Ⅱ：分别将鼠、鸡、人和龟的体细胞在体外培养，结果如图所示。
实验Ⅲ：将年轻细胞的细胞核移植到去核的年老细胞中，在体外培养重组细胞，结果重组细胞分裂活动增强；将年老细胞的细胞核移植到去核的年轻细胞中，在相同条件下培养重组细胞，结果重组细胞分裂活动减弱。
（1）实验Ⅰ说明随着生物体年龄的增长，细胞分裂能力________。
（2）实验Ⅱ说明______________________________。
（3）实验Ⅲ说明__________________。
（4）根据上述实验可知影响细胞衰老的因素有______________等。
