Question

【题目】红细胞含有大量的血红蛋白，我们可以选用猪、牛、羊或其他哺乳动物的血液来提取和分离血红蛋白，请回答下列有关问题：

（1）实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，经处理并离心，收集血红蛋白溶液

①加入柠檬酸钠的目的是________。

②以上所述的过程为样品处理，它包括________、________、分离血红蛋白溶液。

（2）收集的血红蛋白溶液可以在透析袋中透析，这就是样品的粗分离。

①透析的目的是______________。

②透析过程中需要用到________缓冲液。

Answer 1

【答案】防止血液凝固 红细胞的洗涤 血红蛋白的释放 去除分子量较小的杂质 磷酸

【解析】

蛋白质的提取和分离：

1、原理：凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小来分离蛋白质的有效方法，相对分子质量小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程长，移动的速度慢，相对分子质量大的蛋白质不容易进入凝胶内部的通道，路程短，移动的速度快，因此相对分子质量不同的蛋白质得以分离。

2、用磷酸缓冲液处理的目的是让血红蛋白处在稳定的pH范围内，维持其结构和功能。

3、分离血红蛋白溶液时，将搅拌好的混合液转移到离心管中，经过中速长时离心后，可明显看到试管中溶液分为4层，从上往下数，第1层为甲苯层，第2层为脂溶性物质的沉淀层，第3层为血红蛋白水溶液，第4层为杂质沉淀层。

4、气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。

5、血红蛋白的提取与分离的实验步骤主要有：（1）样品处理：①红细胞的洗涤，②血红蛋白的释放，③分离血红蛋白溶液。（2）粗分离：①分离血红蛋白溶液，②透析。（3）纯化：调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质。（4）纯度鉴定--SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。

6、电泳法是利用待测样品中各种分子带电性质的差异和分子本身的大小、形状不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离或鉴定。

（1）①加入柠檬酸钠的目的是防止血液凝固。

②样品处理包括红细胞的洗涤、血红蛋白的释放、分离血红蛋白溶液。

（2）①透析的目的是去除分子量较小的杂质。

②透析过程中需要用到磷酸缓冲液。